大腸桿菌K88、K99廣譜噬菌體的分離與生物學(xué)特性鑒定.pdf

1、自從大腸桿菌第一次被人們發(fā)現(xiàn)以來，致病大腸桿菌在全球范圍內(nèi)給養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的損失。在大腸桿菌眾多的血清型中，尤以E.coli K88、E.coli K99最為廣泛，到目前為止尚無有效的措施和藥物預(yù)防和控制。噬菌體作為一種細(xì)菌病毒，能對(duì)宿主菌進(jìn)行特異裂解，這一特性使得研究者找到了治療細(xì)菌性問題的新思路和新方法。近來相關(guān)研究表明：治療性噬菌體制劑擁有使用劑量小、療效好、無毒副作用、療效快等抗生素?zé)o法比擬的優(yōu)點(diǎn)。美國FDA在2007年批準(zhǔn)上

2、市的大腸桿菌O157：H7噬菌體制劑，標(biāo)志著噬菌體制劑研究的進(jìn)入了臨床研究的新階段。
　　 本試驗(yàn)采用雙層瓊脂平板法來進(jìn)行噬菌體的分離和純化，并且以E.coli K88為宿主菌，分離到1株烈性噬菌體，將其命名為Bp8A0811；以E.coli K99為宿主菌分離得到2株烈性噬菌體，分別將其命名為Bp981226、Bp9C1213。其中2株E.coli K99噬菌體的效價(jià)較高，可以達(dá)到1010pfu/ml，Bp8A0811的效價(jià)與

3、Bp981226、Bp9C1213的效價(jià)為109pfu/ml。剛開始分離得到的噬菌斑較小，經(jīng)進(jìn)一步的純化后，其噬菌斑明顯增大，對(duì)宿主菌的裂解能力增強(qiáng)。通過3株噬菌體對(duì)E.coli K88、E.coli K99及雞大腸桿菌的裂解譜和裂解曲線的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)Bp8A0811基本不能裂解E.coli K99、雞大腸桿菌，其對(duì)這兩種細(xì)菌的裂解曲線與對(duì)照組曲線相差不大。Bp981226、Bp9C1213對(duì)E.coli K99的裂解曲線除了在剛開始的時(shí)

4、候有一點(diǎn)上升，很快就會(huì)下降；Bp981226、Bp9C1213對(duì)E.coli K88的裂解曲線在上升段的時(shí)間比E.coli K99上升段的時(shí)間長，其裂解E.coli K88的能力較Bp8A0811弱。3株噬菌體都不能裂解雞大腸桿菌，且噬菌體與細(xì)菌的混合液的OD600值一直呈上升的趨勢(shì)。
　　 通過對(duì)Bp981226噬菌體生物學(xué)特性研究發(fā)現(xiàn)，其熱穩(wěn)定性較好，在60℃水浴作用30min仍有較高的效價(jià)；但其對(duì)溫度耐受性不高，當(dāng)水浴時(shí)間