乙型腦炎病毒四川株的分離鑒定及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、乙型腦炎(Japanese encephalitis， JE)是由黃病毒科的乙型腦炎病毒(JEV)引起的以蚊蟲為媒介傳播的人畜共患病毒性疾病，豬是JEV的擴(kuò)增宿主，帶毒豬是本病的主要傳染源，因此，防制豬患乙腦不但可以減少養(yǎng)豬業(yè)的損失，而且也是防制乙腦的重要措施。本研究旨在從四川地區(qū)分離豬乙型腦炎病毒，并且對(duì)分離株進(jìn)行系統(tǒng)的生物學(xué)特性研究，為乙型腦炎的流行病學(xué)調(diào)查和分類學(xué)研究提供素材，并為有效地防控型乙腦提供理論依據(jù)。研究?jī)?nèi)容如下：

2、>　　 1.乙型腦炎病毒四川株的分離與鑒定
　　 乙型腦炎病毒的分離：從四川多個(gè)地區(qū)豬場(chǎng)采集流產(chǎn)死胎及蚊蟲樣本30余份，將病料處理后接種BHK21細(xì)胞及3-5日齡乳鼠，細(xì)胞盲傳至第4代時(shí)，接種采自崇州和內(nèi)江豬場(chǎng)蚊蟲樣本的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞堆積、變圓變亮、死亡等疑似JEV病變，96hCPE即達(dá)到95％，隨著傳代代數(shù)的增加，細(xì)胞病變更加穩(wěn)定；采用乳鼠對(duì)崇州及內(nèi)江病料進(jìn)行腦內(nèi)接種，崇州株接種第三代后3天開始發(fā)病，內(nèi)江株則是第五代開始發(fā)病。

3、癥狀均為離群、拒乳、抽搐、發(fā)熱、消瘦，至96～120h出現(xiàn)毛聳、顫抖、強(qiáng)直、肢體痙攣、神經(jīng)系統(tǒng)興奮性增強(qiáng)。隨著時(shí)間的推移，癥狀逐漸加劇，最終轉(zhuǎn)為麻痹而死亡，其死亡率均為100％，剖檢可見腦部充血、水腫。
　　 兩株JEV疑似株的鑒定：以終點(diǎn)稀釋法將病毒液進(jìn)行初步純化；對(duì)所分離病毒進(jìn)行電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察、中和實(shí)驗(yàn)、瓊擴(kuò)實(shí)驗(yàn)、間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)、間接ELISA實(shí)驗(yàn)、以及保守區(qū)序列測(cè)定。結(jié)果為：細(xì)胞超薄切片電子顯微鏡下觀察可見60nm左右

4、病毒顆粒；所分離病毒能被JEV陽(yáng)性血清所中和；瓊擴(kuò)實(shí)驗(yàn)、間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)、間接ELISA實(shí)驗(yàn)均呈陽(yáng)性反應(yīng)；經(jīng)PCR均可擴(kuò)增出其Prm-E基因的高保守區(qū)(439bP)。以上試驗(yàn)證實(shí)本試驗(yàn)所分離到的病毒為JEV，崇州株命名為CZ-1株，內(nèi)江株命名為NJ-1株。
　　 2.四川分離株的生物學(xué)特性分析
　　 病毒的核酸類型實(shí)驗(yàn)證明CZ-1株和NJ-1株均為RNA病毒；有血凝性；理化實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)證實(shí)該兩株病毒均對(duì)乙醚、氯仿和去膽酸鹽敏

5、感，為囊膜病毒，在PH3-5條件下病毒顆粒易失活，經(jīng)胰蛋白酶處理后其感染力明顯下降，60℃加熱60min、100℃加熱3min均可使其滅活。
　　 CZ-1株和NJ-1株病毒TCID50值分別為10-6.206/0.025ml和10-5.215/0.025mL；對(duì)3-5日齡乳鼠的致死性均為100％，對(duì)9-11g小鼠，無論腦內(nèi)、皮下、腹腔毒力都差距不大，但對(duì)14～16g較大日齡小鼠的皮下毒力則差別明顯。取小鼠腦、心、肝、肺、脾、腎