河南省乙型腦炎病毒的分離鑒定及分子特性分析.pdf

1、乙型腦炎(Japanese B encephalitis)是由黃病毒科的乙型腦炎病毒引起的以蚊蟲(chóng)為媒介傳播的一種人畜共患病毒性傳染病,主要導(dǎo)致人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和母豬繁殖障礙,該病不但影響畜牧業(yè)尤其是養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,而且嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康,已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。我國(guó)是乙型腦炎發(fā)病病人最多的國(guó)家,占全球病例總數(shù)80％左右。豬是乙型腦炎最重要的自然增殖動(dòng)物和主要傳染源,蚊蟲(chóng)是傳播媒介,豬→蚊→豬的傳播模式導(dǎo)致病毒得到廣泛傳播和大量增殖,豬

2、→蚊→人的傳播方式導(dǎo)致人的感染和發(fā)病。因此,豬乙型腦炎的有效防制對(duì)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展和人類(lèi)健康均具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。
　　 參考GenBank中(M55506.1)JEV SA14-14-2序列設(shè)計(jì)一對(duì)針對(duì)JEV PrM-C區(qū)的特異性引物,以JEV疫苗株為模板,建立檢測(cè)JEV的RT-PCR方法。應(yīng)用該方法對(duì)JEV疫苗株RNA進(jìn)行擴(kuò)增,獲得與預(yù)期相符的大小為495bp的目的片段；檢出JEV RNA的最低檢出量為10pg。應(yīng)用該方法

3、對(duì)采集的136份蚊蟲(chóng)標(biāo)本進(jìn)行JEV檢測(cè),結(jié)果檢測(cè)到6份為陽(yáng)性。結(jié)果表明,該方法可以用于JEV的快速檢測(cè)。
　　 為了了解河南省JEV的生態(tài)學(xué)分布,在2009年7-9月和2010年7-9月期間,對(duì)河南省駐馬店、周口、信陽(yáng)等7個(gè)地區(qū)的55個(gè)豬舍采集蚊蟲(chóng)標(biāo)本136份,通過(guò)乳鼠接種和Vero細(xì)胞接種傳代,進(jìn)行JEV的分離。通過(guò)RT-PCR檢測(cè)、病毒感染力(TCID50)的滴定和瓊擴(kuò)試驗(yàn)等鑒定,證實(shí)分離到5株JEV,分別命名為HN10-1

4、株、HN10—2株、Shilipu株、Guangshan株和Luoshan株。
　　 應(yīng)用RT-PCR擴(kuò)增分離株的PrM基因,對(duì)其進(jìn)行克隆測(cè)序及進(jìn)化分析,結(jié)果表明:分離到的HN10-1株為JEV基因Ⅰ型,其余四株JEV均屬于基因Ⅲ型。同時(shí)對(duì)Guangshan和Luoshan兩分離株的E基因進(jìn)行克隆測(cè)序及進(jìn)化分析,結(jié)果表明:Guangshan和Luoshan兩分離株的PrM基因的核苷酸同源性為99.0％,氨基酸同源性為97.4％；

5、E基因核苷酸同源性為99.7％,氨基酸同源性99.5％。Guangshan分離株與與疫苗株SA14-14-2的PrM基因的核苷酸同源性達(dá)到99.7％,氨基酸同源性為96.6％；Luoshan分離株與疫苗株SA14-14—2的PrM基因的核苷酸同源性為98.7％,氨基酸同源性為99.1％。而Guangshan分離株與疫苗株SA14-14-2的E基因核苷酸同源性為99.3％,氨基酸同源性為98.7％；Luoshan分離株與疫苗株SA14-1

6、4-2的E基因核苷酸同源性為99.4％,氨基酸同源性為98.9％。與疫苗株SA14-14-2的PrM蛋白氨基酸相比較,Luoshan分離株存在3個(gè)氨基酸差異,分別位于M25(D→G)、M66(G→S)、M67(N→T)、M79(Q→R)；Guangshan分離株存在1個(gè)氨基酸差異,位于M67(N→T)。與疫苗株SA14-14-2的E蛋白氨基酸相比較,Luoshan株存在3個(gè)氨基酸差異,分別位于E218(F→I)、E331(S→C)、E3