河南省乙型腦炎病毒的分離鑒定及分子特性分析.pdf

1、乙型腦炎(Japanese B encephalitis)是由黃病毒科的乙型腦炎病毒引起的以蚊蟲為媒介傳播的一種人畜共患病毒性傳染病,主要導(dǎo)致人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病和母豬繁殖障礙,該病不但影響畜牧業(yè)尤其是養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,而且嚴(yán)重威脅人類健康,已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。我國是乙型腦炎發(fā)病病人最多的國家,占全球病例總數(shù)80％左右。豬是乙型腦炎最重要的自然增殖動(dòng)物和主要傳染源,蚊蟲是傳播媒介,豬→蚊→豬的傳播模式導(dǎo)致病毒得到廣泛傳播和大量增殖,豬

2、→蚊→人的傳播方式導(dǎo)致人的感染和發(fā)病。因此,豬乙型腦炎的有效防制對養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展和人類健康均具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。
　　 參考GenBank中(M55506.1)JEV SA14-14-2序列設(shè)計(jì)一對針對JEV PrM-C區(qū)的特異性引物,以JEV疫苗株為模板,建立檢測JEV的RT-PCR方法。應(yīng)用該方法對JEV疫苗株RNA進(jìn)行擴(kuò)增,獲得與預(yù)期相符的大小為495bp的目的片段；檢出JEV RNA的最低檢出量為10pg。應(yīng)用該方法

3、對采集的136份蚊蟲標(biāo)本進(jìn)行JEV檢測,結(jié)果檢測到6份為陽性。結(jié)果表明,該方法可以用于JEV的快速檢測。
　　 為了了解河南省JEV的生態(tài)學(xué)分布,在2009年7-9月和2010年7-9月期間,對河南省駐馬店、周口、信陽等7個(gè)地區(qū)的55個(gè)豬舍采集蚊蟲標(biāo)本136份,通過乳鼠接種和Vero細(xì)胞接種傳代,進(jìn)行JEV的分離。通過RT-PCR檢測、病毒感染力(TCID50)的滴定和瓊擴(kuò)試驗(yàn)等鑒定,證實(shí)分離到5株JEV,分別命名為HN10-1

4、株、HN10—2株、Shilipu株、Guangshan株和Luoshan株。
　　 應(yīng)用RT-PCR擴(kuò)增分離株的PrM基因,對其進(jìn)行克隆測序及進(jìn)化分析,結(jié)果表明:分離到的HN10-1株為JEV基因Ⅰ型,其余四株JEV均屬于基因Ⅲ型。同時(shí)對Guangshan和Luoshan兩分離株的E基因進(jìn)行克隆測序及進(jìn)化分析,結(jié)果表明:Guangshan和Luoshan兩分離株的PrM基因的核苷酸同源性為99.0％,氨基酸同源性為97.4％；

5、E基因核苷酸同源性為99.7％,氨基酸同源性99.5％。Guangshan分離株與與疫苗株SA14-14-2的PrM基因的核苷酸同源性達(dá)到99.7％,氨基酸同源性為96.6％；Luoshan分離株與疫苗株SA14-14—2的PrM基因的核苷酸同源性為98.7％,氨基酸同源性為99.1％。而Guangshan分離株與疫苗株SA14-14-2的E基因核苷酸同源性為99.3％,氨基酸同源性為98.7％；Luoshan分離株與疫苗株SA14-1

6、4-2的E基因核苷酸同源性為99.4％,氨基酸同源性為98.9％。與疫苗株SA14-14-2的PrM蛋白氨基酸相比較,Luoshan分離株存在3個(gè)氨基酸差異,分別位于M25(D→G)、M66(G→S)、M67(N→T)、M79(Q→R)；Guangshan分離株存在1個(gè)氨基酸差異,位于M67(N→T)。與疫苗株SA14-14-2的E蛋白氨基酸相比較,Luoshan株存在3個(gè)氨基酸差異,分別位于E218(F→I)、E331(S→C)、E3