河南省病毒性腦炎流行病學(xué)與病原學(xué)調(diào)查.pdf

1、目的：本研究是根據(jù)我省歷年來(lái)上報(bào)的乙型腦炎資料分析我省乙型腦炎的流行趨勢(shì)，并在不同生態(tài)環(huán)境中捕捉蚊蟲(chóng)標(biāo)本，找出我省不同生態(tài)環(huán)境中的優(yōu)勢(shì)蚊種，同時(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)的方法從蚊體內(nèi)分離病毒，并用常規(guī)PCR和熒光PCR的方法進(jìn)行初步鑒定，篩選乙型腦炎病毒，為以后對(duì)病毒進(jìn)行核苷酸序列分析、鑒定病毒種類(lèi)、研究我省存在的乙腦病毒與國(guó)內(nèi)、外其他地域同種病毒的差異，繪制系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)，進(jìn)而研究病毒的進(jìn)化規(guī)律和分析目前使用的疫苗有無(wú)保護(hù)作用打下基礎(chǔ)。 方法：

2、 1.資料收集：根據(jù)歷年來(lái)我省上報(bào)的乙型腦炎資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，參考我省已發(fā)表的有關(guān)此課題的文獻(xiàn)，進(jìn)行分析乙腦流行趨勢(shì)及其原因。 2.標(biāo)本的收集運(yùn)輸：在不同生態(tài)環(huán)境中將捕到蚊子，快速凍死后剔除雄蚊，將蚊子分類(lèi)，50～100只為一組，裝入凍存管中，用醫(yī)用膠布封口，并用記號(hào)筆編號(hào)，凍存管放入布袋中后及時(shí)放入液氮中，送至實(shí)驗(yàn)室。 3.根據(jù)在我省不同生態(tài)環(huán)境中采集蚊蟲(chóng)標(biāo)本結(jié)果，分析我省不同生態(tài)環(huán)境中蚊種的構(gòu)成，找出優(yōu)勢(shì)蚊種。

3、 4.利用BHK和Vero細(xì)胞培養(yǎng)的方法對(duì)蚊子攜帶的病毒進(jìn)行分離。 5.用TRIZOLLSReagent提取分離到病毒的RNA，再用常規(guī)PCR和熒光PCR方法進(jìn)行初步鑒定。 結(jié)果： 1.河南省乙型腦炎發(fā)病情況同我國(guó)總的情況基本一致。自20世紀(jì)70年代后期大規(guī)模使用乙腦疫苗后，除1990與1991年有個(gè)小發(fā)病高峰外，乙腦發(fā)病率在顯著下降，2004年發(fā)病率達(dá)到了0.39/10萬(wàn)；發(fā)病具有明顯的季節(jié)性，85％以上

4、病例發(fā)生集中在7、8、9三個(gè)月，這與我省蚊蟲(chóng)出現(xiàn)隨季節(jié)性變化而變化的特點(diǎn)相一致；病例主要分布于氣溫相對(duì)較高、雨量相對(duì)偏多的豫南、豫東南的信陽(yáng)、駐馬店、南陽(yáng)市、周口市以及商丘的部分地區(qū)，平頂山、洛陽(yáng)、偶有集中發(fā)病，黃河以北地區(qū)發(fā)病相對(duì)減少。年齡分布主要集中于10歲以下兒童，占80％以上，5歲以下病例約占50％，男女性別比為1.4∶1。 2.本次實(shí)驗(yàn)在我省不同生態(tài)環(huán)境中共捕獲蚊蟲(chóng)25787只，其中庫(kù)蚊18999只，按蚊2715只，伊

5、蚊85只，阿蚊3878只。庫(kù)蚊占全部蚊蟲(chóng)的73.7％，按蚊占10.5％，伊蚊0.3％，阿蚊占15％，可見(jiàn)庫(kù)蚊為我省優(yōu)勢(shì)蚊種。山區(qū)、平原和濕地均以庫(kù)蚊為主，山區(qū)及濕地未能捉到伊蚊；而丘陵地區(qū)按蚊和阿蚊為優(yōu)勢(shì)蚊種，庫(kù)蚊和伊蚊較少；在黃河濕地阿蚊也占一定比例。 3.隨機(jī)將每個(gè)生態(tài)環(huán)境中所捕蚊子取出10管，組成一個(gè)組，研磨接種細(xì)胞，進(jìn)行病毒分離。共分離到8株可疑病毒，均能引起B(yǎng)HK細(xì)胞和Vero細(xì)胞穩(wěn)定病變。BHK細(xì)胞病變以圓縮和脫落為

6、主，而Vero細(xì)胞病變以聚集、拉網(wǎng)、圓縮為主。出現(xiàn)病變時(shí)一般在48～72小時(shí)之間，均具有濾過(guò)性(0.22μm濾過(guò)膜)，其中4株病毒帶回北京進(jìn)行鑒定，其余4株病毒經(jīng)常規(guī)PCR及熒光PCR鑒定發(fā)現(xiàn)有一株為乙型腦炎病毒。 結(jié)論： 河南省于1953年從病人的腦組織中分離到了乙腦病毒，1991年在河南省新安縣采集了淡色庫(kù)蚊300只、阿蚊450和三帶喙庫(kù)蚊30只，利用細(xì)胞和乳鼠對(duì)全部標(biāo)本進(jìn)行了病毒分離，結(jié)果從淡色庫(kù)蚊中分離出1株病毒