浙江省手足口病流行病學(xué)和病原學(xué)特征分析.pdf

1、手足口病是由多種腸道病毒引起的一種常見兒童傳染病，在2008年納入我國法定報告的丙類傳染病。多數(shù)手足口病患兒臨床癥狀和體征輕微，以發(fā)熱及手、足口腔等部位的皮疹或皰疹為主要特征，少數(shù)患兒可并發(fā)無菌性腦膜腦炎、呼吸道感染、心肌炎等致死性并發(fā)癥。手足口病給兒童的健康造成較為嚴(yán)重的威脅。
　　目的:
　　1.調(diào)查2010-2013年臨床確診手足口病患者腸道病毒的感染情況;了解浙江省手足口病腸道病毒的流行病學(xué)特征;明確影響腸道病毒檢出

2、率的影響因素，為手足口病的有效防控提供科學(xué)依據(jù)。
　　2.通過手足口病CoxA6病毒VP1基因進(jìn)行核苷酸序列測定，分析CoxA6病毒分離株的基因特征，進(jìn)一步了解手足口病CoxA6病毒的分子生物學(xué)性狀及與其他地區(qū)流行的手足口病CoxA6病毒毒株的遺傳進(jìn)化距離，探討我省手足口病CoxA6病毒變異的分子基礎(chǔ)。為CoxA6病毒的變異變遷研究打下基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.臨床標(biāo)本檢測及病毒分離:采用一步法熒光定量RT-PCR探

3、針法和普通PCR或RT-PCR法對臨床確診手足口病患者的標(biāo)本進(jìn)行腸道病毒、EV71、CoxA16、CoxA6 CoxA10病毒檢測，將本實驗室部分CoxA6病毒檢測陽性標(biāo)本接種到橫紋肌瘤細(xì)胞（RD）進(jìn)行病毒的分離培養(yǎng)。
　　2.分子生物學(xué)實驗:對分離毒病株采用EV71、Cox A16、Cox A6病毒核酸檢測試劑盒進(jìn)行驗證，并使用自己設(shè)計的特異性引物分別對毒株進(jìn)行擴增;對于病毒核酸檢測為陽性的標(biāo)本，進(jìn)行普通RT-PCR擴增，將PC

4、R產(chǎn)物送杭州華大基因有限公司測序。
　　3.生物信息學(xué)分析:參考Cox A6的代表株以及中國大陸其他地區(qū)測定的手足口病Cox A6 VP1基因序列，應(yīng)用DNASTAR、DANMAN等生物學(xué)軟件對浙江地區(qū)手足口病病毒核苷酸序列進(jìn)行系統(tǒng)的分析。
　　結(jié)果:
　　1.人口學(xué)特征
　　從2010年1月1日至2013年12月31日共有4218例手足口病診斷病例，在這些手足口病臨床診斷病例中男性患者2686例，女性患者153

5、2例，男/女性別比例為1.75（2010年男/女:1.66∶1，2011年男/女:2.16∶1，2012年男/女:1.58∶1，2013年男/女:1.59∶1）;絕大多數(shù)病例集中在5歲以下兒童(93％)，其中以1-＜3歲組最多(52％)，并且患兒中散居兒童占主要部分，其次為幼兒園兒童。
　　2.時間分布
　　從2010年至2013年臨床診斷手足口病數(shù)據(jù)可見手足口病雖然全年可發(fā)，但4-6月發(fā)病例數(shù)明顯開始上升（2013年3-6

6、月），2010年和2011年發(fā)病高峰出現(xiàn)在5月，2012年和2013年發(fā)病高峰出現(xiàn)在6月。2010和2011年浙江省手足口病發(fā)病率的時間分布相似，一年內(nèi)有一個發(fā)病高峰。2012年和2013年9月份出現(xiàn)發(fā)病次高峰。
　　3.病原分布
　　腸道病毒總檢出率為71.08％。2010年檢出腸道病毒核酸陽性樣本873例，其中EV71陽性454例(52.0％)，CoxA16陽性235例(26.9％)，其他腸道病毒陽性184例(21.1％

7、)。2011年檢出腸道病毒核酸陽性的樣本有839例，其中EV71陽性378例(45.1％)，CoxA16陽性252例(30.0％)，其他腸道病毒陽性209例(24.9％)。2012年，檢出腸道病毒核酸陽性的樣本有595例，其中EV71陽性240例(40.3％)，CoxA16陽性186例(31.3％)，EV71、CoxA16同時陽性35例(5.9％)，其他腸道病毒陽性134例(22.5％)，顯示2010年至2012年優(yōu)勢病原為EV71，其

8、次為CoxA16。2013年，檢出腸道病毒核酸陽性的樣本有711例，其中EV71陽性142例(20.0％)，CoxA16陽性20例(2.8％)，其他腸道病毒陽性549例(77.2％)，結(jié)果顯示2013年手足口病優(yōu)勢病原體為其他腸道病原體，EV71、CoxA16檢出率明顯下降(P＜0.05)，我們選取2013年的549例其他腸道病毒陽性樣本中的267例進(jìn)行CoxA6和A10核酸檢測，結(jié)果顯示:其中CoxA6陽性137例(51.3％，137

9、/267)，CoxA10陽性16例(6.0％，16/267)
　　4.不同類型標(biāo)本腸道病毒核酸檢出情況
　　2010年至2013年，共采集4246份樣本，其中咽拭子1421份、糞便2803份、皰疹液22份。咽拭子腸道病毒核酸檢出率為65.1％;皰疹液腸道病毒核酸均為陽性，陽性檢出率為100％;糞便標(biāo)本腸道病毒核酸檢出率為76.2％，皰疹液病毒檢出率最高，其次為糞便，咽拭子病毒檢出率較低。
　　5.我們共分離CoxA6病

10、毒株各15株，并選擇4株進(jìn)行基因序列測定和擴增，核苷酸序列進(jìn)行同源性比對，同源性為:89.3-99.6％;分別將四株序列在NCBI上進(jìn)行Blast同源性檢索，最終我們選取了34株序列（全部來自GenBank中）進(jìn)行建樹進(jìn)化分析，分析發(fā)現(xiàn)其中一株CA6-1-43與其他三株在樹形上的位置相距較遠(yuǎn)。
　　結(jié)論:
　　1.2010-2012年，浙江省手足口臨床診斷病例的優(yōu)勢病原體為EV71，其次為CoxA16;2013年開始為其他腸

11、道病毒為主（即非EV71、Cox16），其中Cox6陽性率上升顯著，手足口病優(yōu)勢病原體發(fā)生變化。
　　2.2010-2013年，手足口病均在5-6月期間出現(xiàn)發(fā)病高峰，2012年和2013年在9月份出現(xiàn)發(fā)病次高峰，說明手足口病發(fā)病和流行具有明顯的季節(jié)性，夏季和冬季手足口病病例數(shù)下降，說明病毒的流行傳播可能受到極端溫度的限制;手足口病發(fā)病人群以＜5歲的散居兒童為主，男女性別的發(fā)病率男性大于女性。
　　3.Cox A6毒株基因同源