廣西豬乙型腦炎病毒的分離鑒定及血清流行病學(xué)調(diào)查研究.pdf

1、乙型腦炎( Japanese encephalitis， JE)由乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus， JEV)引起，是世界上特別是亞洲東部和東南部最重要的病毒性腦炎之一，死亡率高達20-50％。JEV是一種蚊媒黃病毒，在蚊子、豬和水鳥中循環(huán)傳播。在JE病例中，大部分的存活者尤其是兒童具有持久性的神經(jīng)系統(tǒng)和精神病方面的后遺癥。同時，JE還對養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。JE已是一個主要的公共衛(wèi)生問題。對于

2、JE，迄今為止還沒有特效療法，預(yù)防是最好的防御措施。
　　 豬是JE最重要的傳染源。為了了解廣西豬JE的流行情況，更好地預(yù)防該病，我們進行了一系列的研究。
　　 首先，根據(jù)GenBank上登錄的JEVE基因序列，設(shè)計了內(nèi)外2對引物，以JEV疫苗株為模板，建立了檢測豬JEV的套式RT-PCR(RT-nested-PCR)方法。應(yīng)用該方法對JEV疫苗株RNA進行擴增，獲得與預(yù)期大小相符，長度為228bp的目的片段；檢出JEV

3、-RNA的靈敏度約為0.3pg。應(yīng)用該方法，對從廣西各地豬場采集的142份豬腦組織、流產(chǎn)的仔豬死胎、種公豬精液、蚊子樣品進行檢測，結(jié)果有34份為JEV陽性。結(jié)果表明，所建立的RT-nested-PCR方法對JEV的檢測敏感性高、特異性強、簡便易行，是JE早期快速診斷的有力工具；廣西JE感染率較高。
　　 其次，從檢測得到的34份陽性樣品中選擇了1份死胎豬腦組織和1份種公豬精液分別接種BHK-21細(xì)胞、乳鼠及雞胚進行JEV的分離。

4、通過RT-nested-PCR檢測、間接免疫熒光試驗、病毒感染力(TCID50)的滴定、中和試驗等的鑒定，證實所分離的兩株為乙型腦炎病毒，分別命名為GP株和LC株。
　　 應(yīng)用RT-PCR擴增出GP株和LC株的E基因，并進行了序列測定分析。遺傳進化分析表明，分離得到的GP株和LC株均屬于基因型Ⅲ型，與疫苗株SA14-14-2的親緣關(guān)系最近。GP株和LC株之間的核苷酸和氨基酸同源性均為99.8％；GP株和LC株與疫苗株SA14-1

5、4-2的核苷酸同源性分別為99.7％和99.8％，氨基酸同源性分別為99.4％和99.6％。與疫苗株SA14-14-2的E蛋白相比較，GP株存在3個氨基酸差異；LC株有2個氨基酸差異。兩個毒株E163位氨基酸的變異(Q→R)可能引起其抗原活性的改變。
　　 最后，應(yīng)用豬乙型腦炎乳膠凝集試驗抗體檢測試劑盒對2008-2009年從廣西12個市采集的1676份豬血清進行乙腦流行病學(xué)調(diào)查。結(jié)果，1676份血清中，JE抗體陽性923份，陽