副豬嗜血桿菌分型血清的制備及四川地區(qū)血清流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）引起豬的一種接觸性細(xì)菌性傳染病，嚴(yán)重威脅著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。長(zhǎng)期以來(lái)，HPS血清型復(fù)雜，分型血清制備較困難，方法不標(biāo)準(zhǔn)，為有利于本病的病原學(xué)診斷，本試驗(yàn)采用HPS的15個(gè)血清型標(biāo)準(zhǔn)菌株制備免疫原免疫健康雄性家兔，成功制備HPS分型血清，并選用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)對(duì)四川地區(qū)HPS田間分離株進(jìn)行血清型鑒定，旨在從病原學(xué)角度對(duì)四川地區(qū)HPS優(yōu)勢(shì)血清型的流行情況以及血清型

2、的分布規(guī)律進(jìn)行調(diào)查，為四川地區(qū)該病的針對(duì)性防控提供科學(xué)依據(jù)。
　　1.HPS分型血清制備的免疫程序的優(yōu)化篩選
　　從澳大利亞昆士蘭州動(dòng)物研究所購(gòu)買(mǎi)HPS的15個(gè)血清型的標(biāo)準(zhǔn)菌株，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行復(fù)蘇與鑒定，進(jìn)一步證實(shí)標(biāo)準(zhǔn)菌株的準(zhǔn)確性，為分型血清的制備奠定基礎(chǔ)。通過(guò)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室原有免疫程序進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化后的免疫程序提高了菌液免疫次數(shù)，縮短了免疫間隔時(shí)間，降低了免疫劑量，同時(shí)基礎(chǔ)免疫之前增加了免疫誘導(dǎo)。采用優(yōu)化后的免疫程序進(jìn)行HPS

3、5型分型血清的制備，同時(shí)以文獻(xiàn)報(bào)道的3種不同的免疫程序作為對(duì)照組，免疫結(jié)束后心臟采血，并分離血清，對(duì)血清采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)進(jìn)行特異性檢測(cè)，采用IHA試劑盒進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)。結(jié)果表明:血清特異性良好，試驗(yàn)組與對(duì)照組家兔血清通過(guò)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)均能產(chǎn)生明顯沉淀線(xiàn)，空白對(duì)照組瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)未產(chǎn)生沉淀線(xiàn)，并且試驗(yàn)組血清抗體效價(jià)達(dá)1∶32，均高于3個(gè)對(duì)照組，因此，優(yōu)化后的免疫程序可推廣用于HPS其它血清型分型血清的制備。
　　2.HPS分型血清的制

4、備及其臨床應(yīng)用
　　利用HPS的15個(gè)血清型的標(biāo)準(zhǔn)菌株制備免疫原，采用優(yōu)化后的免疫程序通過(guò)皮下注射與耳緣靜脈注射免疫原的方式免疫健康雄性家兔，免疫結(jié)束后采集心血并分離血清，對(duì)血清進(jìn)行特異性與抗體效價(jià)檢測(cè)，結(jié)果表明血清特異性良好，抗體效價(jià)均達(dá)到1∶8以上，用于HPS田間分離菌株的血清型鑒定取得良好效果。本實(shí)驗(yàn)室2013年至2014年，從四川22個(gè)市區(qū)80個(gè)豬場(chǎng)中共采集498份病料，從這些病料中共分離出80株HPS。采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)對(duì)