雞傳染性支氣管炎病毒（重慶株）的分離鑒定及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(Avian Infectious Bronchitis，IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病。上世紀(jì)30年代在美國(guó)爆發(fā)以來(lái)，現(xiàn)在已經(jīng)成為世界各地流行的主要禽病。目前，我國(guó)IB的發(fā)生已經(jīng)遍布華北、西北、西南和東北等大部分省、市和自治區(qū)，雖然已廣泛使用IB疫苗，但I(xiàn)B仍然普遍存在，尤其是在已免疫雞群中又常常爆發(fā)IB，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損

2、失。 IBV是單股RNA病毒，該病毒基因可由于點(diǎn)突變和重組而發(fā)生變異，故此傳染性支氣管炎病毒的血清型較多，已達(dá)30余種之多。已知的以侵害呼吸道為主的血清型有Conn、 lowa97、JMK、Florida、Arkansas99等和以侵害腎臟為主的M41、Holte、Gray、Australia等血清型。 2006年4月，重慶某雞場(chǎng)在已經(jīng)進(jìn)行了IB的常規(guī)免疫程序后，仍爆發(fā)了嚴(yán)重的疑似雞傳染性支氣管炎病。為了找出確切的病原，

3、我們對(duì)該致病病原進(jìn)行了分離鑒定，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了研究。 病原的分離與鑒定：無(wú)菌采集病死雞及瀕死雞嚴(yán)重病變腫大的腎臟制成懸液，菌檢陰性后按照常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法經(jīng)雞胚傳代，收集6代雞胚尿囊液，用1％的雞紅細(xì)胞進(jìn)行血凝試驗(yàn)檢驗(yàn)是否含有新城疫病毒、流感病毒。結(jié)果表明，尿囊液無(wú)直接血凝性，用1％胰蛋白酶處理后出現(xiàn)血凝性。將6代雞胚尿囊液裝入透析袋埋入固體PEG6000中進(jìn)行濃縮純化，經(jīng)過(guò)濾除菌，濾液即為濃縮純化的病原液。將濃縮純化的病原液

4、進(jìn)一步經(jīng)致雞胚矮小化試驗(yàn)、新城疫干擾試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)和氣管環(huán)組織培養(yǎng)交叉中和試驗(yàn)證實(shí)了分離到的病原為雞傳染性支氣管炎病毒。 IBV重慶株理化性質(zhì)的測(cè)定：通過(guò)半數(shù)雞胚感染量試驗(yàn)測(cè)定EID<,50>為10<'-6.74>/mL；通過(guò)半數(shù)氣管環(huán)感染量試驗(yàn)測(cè)得TOCID<,50>為10<'-4.52>/mL；氯仿敏感試驗(yàn)表明重慶株對(duì)氯仿敏感；乙醚敏感試驗(yàn)表明重慶株對(duì)乙醚敏感：熱穩(wěn)定試驗(yàn)表明重慶株對(duì)熱敏感；酸堿敏感試驗(yàn)表明pH3.0與p

5、H11.0的酸堿環(huán)境均可降低重慶株的毒力。用氣管環(huán)組織培養(yǎng)交叉中和試驗(yàn)鑒定分離株的血清型，結(jié)果重慶株與標(biāo)準(zhǔn)T陽(yáng)性血清有一定交叉反應(yīng)，中和效價(jià)為1∶32，與其他Mussachusetts、Arkansas、Connecticut．Gray等血清型中和效價(jià)均為0，表明重慶株是一株IBV變異毒株。 IBV重慶株S1基因的克隆測(cè)序分析：提取IBV重慶株的RNA，對(duì)其S1基因應(yīng)用RT-PCR方法進(jìn)行了克隆與測(cè)序，使用DNAStar軟件進(jìn)行序列分析