雞傳染性支氣管炎病毒XT株的分離鑒定及S1基因、M基因的序列分析.pdf

1、本研究從北京某集團(tuán)公司邢臺(tái)地區(qū)的肉雞場(chǎng)，采集疑似雞傳染性支氣管炎的發(fā)病雞病料，從中分離得到一株病毒，命名為XT株，并對(duì)其理化及生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定，最終通過基因的測(cè)序、對(duì)比，來分析它的遺傳變異性。
　　無菌采集疑似患傳染性支氣管炎病雞的氣管、腎臟、腺胃等，研磨制成病毒液，在10日齡SPF雞胚上傳代，并收集尿囊液。尿囊液對(duì)雞紅細(xì)胞無直接血凝性，經(jīng)1％胰酶處理后出現(xiàn)血凝現(xiàn)象;新城疫干擾試驗(yàn)顯示XT株F5代尿囊液對(duì)新城疫Lasota株在雞

2、胚中的復(fù)制具有干擾作用，使其血凝效價(jià)下降了2～3個(gè)值;將XT株F5代尿囊液接種10日齡雞胚144 h后，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組雞胚發(fā)育遲緩，經(jīng)SPSS V17分析兩組雞胚體重差異極顯著，說明XT株對(duì)雞胚具有致矮小作用;病毒回歸試驗(yàn)動(dòng)物后，雞只出現(xiàn)了典型的IBV臨床及解剖癥狀，且采集所有雞只病料分離得到的病毒液，經(jīng)IBV RT-PCR診斷試劑盒檢測(cè)，對(duì)照組均為陰性，試驗(yàn)組絕大多數(shù)為陽(yáng)性，說明試驗(yàn)雞不同程度的感染了IBV。
　　XT株理

3、化特性試驗(yàn)表明:該病毒對(duì)酸(pH3.0)堿(pH11.0)均敏感，并且病毒對(duì)酸的耐受力要比對(duì)堿的耐受力略強(qiáng);經(jīng)56℃，1h水浴加熱，毒力下降了3個(gè)滴度，而添加Mg2+組毒力下降不到2個(gè)滴度，說明病毒對(duì)熱敏感，Mg2+能提高其耐熱性;病毒對(duì)有機(jī)溶劑乙醚、氯仿均敏感，處理后毒力均下降了2～3個(gè)滴度，以上特性均符合傳染性支氣管炎病毒的相關(guān)特性。經(jīng)測(cè)定，XT株F5代病毒液的EID50為10-5.69/0.1ml;血清交叉中和試驗(yàn)結(jié)果顯示:XT株

4、與傳支疫苗株H120、W93的關(guān)系系數(shù)分別為77.98％、44.88％，依據(jù)判定標(biāo)準(zhǔn)（R＞80％，兩毒株為同一亞型;25％＜R＜80％，兩毒株為同一血清型的不同亞型;R＜25％，兩毒株為不同血清型），XT株與二者均為同一血清型的不同亞型。
　　本試驗(yàn)對(duì)XT株的S1基因、M基因進(jìn)行了克隆測(cè)序，并與Genbank中已發(fā)表的18個(gè)參考株S1基因、M基因進(jìn)行了比較分析，結(jié)果顯示，XT株S1基因與國(guó)內(nèi)常用疫苗株H120、H52、Ma5、M4