2011-2012年雞傳染性支氣管炎病毒的分離鑒定及S1基因序列分析.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(IB)是由雞傳染治支氣管炎病毒引起的雞的一種急性、高度接觸傳染性的呼吸道疾病。該病首次爆發(fā)于上世紀(jì)三十年代，目前已在世界范圍內(nèi)流行，成為危害禽業(yè)發(fā)展的主要傳染病之一。IBV有眾多的血清型，不同血清型之間沒(méi)有或僅有部分交叉免疫保護(hù)性，給該病的防治帶來(lái)了很大的困難。
　　本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)2011～2012年由北京、山東、遼寧、廣西、江蘇、河北六省采集的病料進(jìn)行病毒的分離與鑒定，最終確定了17株IBV病毒分離株。
　

2、　對(duì)疑似雞傳染性支氣管炎的病料采用常規(guī)方法處理后接種11日齡SPF雞胚，連續(xù)盲傳3～5代。所有的IBV分離株經(jīng)過(guò)盲傳之后均能引起雞胚出現(xiàn)明顯的生長(zhǎng)抑制。對(duì)17株分離株中的11株進(jìn)行了3次有限稀釋純化(F1～F3)，將純化后的病毒接種雞胚，記為F4代。F4代雞胚尿囊液經(jīng)過(guò)1％的胰酶處理后，血凝效價(jià)在26～29之間。F4代尿囊液與NDV弱毒疫苗株La Sota同時(shí)接種雞胚，能夠明顯抑制NDV的復(fù)制。對(duì)HC13株進(jìn)行了動(dòng)物回歸試驗(yàn)，結(jié)果顯示:

3、HC13株能夠引起雛雞出現(xiàn)呼吸道利腎臟病變，并造成了45％的死亡率。
　　對(duì)17株IBV分離株進(jìn)行了 S1基因的序列測(cè)定，將測(cè)序結(jié)提交NCBI，并獲得了相應(yīng)的基因登錄號(hào)。通過(guò)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn):17株分離株之間的核苷酸及氨基酸同源性分別為84.7％～99.8％，82.6％～99.4％，與52株參考株之間的核苷酸及氨基酸同源性分別為73.2％～99.6％，70.0％～99.8％;分離株與疫苗株H120的S1基因之間的核苷酸及氨基酸同源性分

4、別為76.9％～82.2％，75.8％～80.6％;與疫苗株H120相比，分離株S1基因存在廣泛的點(diǎn)突變、堿基插入和缺失等現(xiàn)象。
　　對(duì)17株分離株及52株參考株進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析，結(jié)果顯示:69株IBV毒株可分為9個(gè)進(jìn)化群，17株分離株中有14株屬于基因進(jìn)化群Ⅰ，與現(xiàn)今中國(guó)流行株LX4、QXIBV同屬一群，基因進(jìn)化群Ⅰ所有毒株的S蛋白裂解識(shí)別位點(diǎn)均為HRRRR;分離株HC18與疫苗株4/91同屬于基因進(jìn)化群Ⅱ;17株分離株與我

5、國(guó)疫苗株H120，M41，28/86等分屬不同的基因進(jìn)化群，進(jìn)化關(guān)系較遠(yuǎn)。
　　中和試驗(yàn)結(jié)果顯示疫苗株M41與分離株HC10及HC13屬于不同的血清型。血清交叉中和試驗(yàn)結(jié)果結(jié)合結(jié)合同源性分析可以得出:基因同源性能從一定程度上反映抗原相關(guān)性，但基因序列發(fā)生變化不一定表示抗原性發(fā)生變化。
　　S1基因是IBV的主要免疫原基因，S1蛋白能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體、血凝抑制抗體、交叉反應(yīng)ELISA抗體及細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，從而使機(jī)體受