雞傳染性支氣管炎病毒山東分離株S1和N基因的遺傳變異分析.pdf

1、為探明山東地區(qū)IBV的分子流行病學(xué)情況，本文挑取實驗室1992-2005年間分離，曾經(jīng)對分離雞群造成嚴(yán)重?fù)p失的疑似IBV流行株，對病毒的S1、N基因進(jìn)行分析比較，從分子水平上探討山東省IBV的流行和變異規(guī)律。主要研究內(nèi)容如下： 試驗一雞傳染性支氣管炎病毒山東流行株的鑒定對8株山東疑似IBV流行株，進(jìn)行了致雞胚矮小化試驗、新城疫病毒干擾試驗、動物回歸試驗、血凝性試驗和理化性質(zhì)測定，證實該8株山東分離株均為IBV，命名為：SDD、S

2、DB、SH、IBVQ、LC2、WF、HD和GE。該8株IBV與H120陽性血清進(jìn)行氣管環(huán)組織培養(yǎng)交叉中和試驗，試驗表明：SH、WF、LC2與H120陽性血清交叉指數(shù)高。 試驗二傳染性支氣管炎病毒山東分離株S1基因的遺傳變異性分析參照已發(fā)表的IBVS1基因序列，設(shè)計一對特異引物，通過RT-PCR均擴(kuò)增出8株IBVS1的目的條帶，并對其克隆測序。將8株山東省IBV分離株與參考株的S1基因進(jìn)行序列分析比較，山東株間核苷酸同源性為77.

3、7％～997.％，氨基酸同源性在78.5％-97.7％，系統(tǒng)發(fā)生樹分析發(fā)現(xiàn)山東地方流行株均屬于同一群，表明8株山東IBV分離株具有較近的親緣關(guān)系，說明山東省IBV的分離毒株有明顯的地域性，時間性不明顯。 試驗三雞傳染性支氣管炎病毒山東流行株和疫苗株N基因遺傳變異分析參照已發(fā)表的IBVN基因序列，設(shè)計一對特異引物，通過RT-PCR擴(kuò)增出9株IBV(SDD、SDB、SH、IBVQ、LC2、WF、HD、GE和山東分離株IBVZ)、3株

4、疫苗株(H120、H52、Ma5)、變異株4/91、標(biāo)準(zhǔn)株M41的N基因序列，克隆測序，將以上14株IBV及參考株的N基因進(jìn)行序列分析，發(fā)現(xiàn)8株嗜腎型山東地方流行株(SDD、SDB、SH、IBVQ、LC2、WF、HD、IBVZ)間氨基酸序列同源性為92.9％-99.3％，4株疫苗株間(H120、H52、Ma5、M41)的氨基酸序列同源性92.2-99.3％％，而8株嗜腎型山東分離株與6株參考株間的氨基酸序列同源性87％-92.2％，說明

5、山東地方流行株間具有較近的親緣關(guān)系，疫苗株間親緣關(guān)系較近，N基因蛋白在進(jìn)化過程中存在一定的變異，但比S1基因保守。 試驗四雞傳染性支氣管炎病毒S1和N基因遺傳變異相關(guān)性的研究對9株山東流行株、4株疫苗及變異株4/91的S1基因片段和全長、N基因的片段和全長、S1和N基因全長分別進(jìn)行遺傳變異的研究，利用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS11.5進(jìn)行同源性相關(guān)分析，結(jié)果表明：不同IBV毒株S1基因片段與其全長之間，核苷酸(r≥0.892)、氨基酸(

6、0.854≤r≤0.935)遺傳變異高度相關(guān)，不同IBV毒株N基因片段與其全長之間，核苷酸(r≥0.941)、氨基酸(0.878≤r≤0.979)遺傳變異高度相關(guān)。但S1與N基因全長之間核苷酸的遺傳變異呈現(xiàn)中度相關(guān)(r=0.645)。國內(nèi)IBV疫苗株之間S1和N基因核苷酸高度同源(S1≥97.3％；N≥90.7％)，而野毒株與疫苗株相比S1和N基因同源率均較低(S1≤84.3％；N≤87.1％)，這就解釋了常規(guī)疫苗不能很好的保護(hù)野毒株的