雞嗜腎型傳染性支氣管炎病毒X株的分離、鑒定及其S1基因序列的測定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該實驗首先利用雞胚分離法由發(fā)生腎變病型傳染性支氣管炎的病雞分離到了嗜腎型傳染性支氣管炎病毒X株,該病毒株能引起雞胚發(fā)育受阻,雞胚和雛雞腎臟腫大、輸尿管尿酸鹽沉積,能被IBV-M型血清部分中和.然后采用RT-PCR和套式PCR成功地擴增出IBV X株S1基因,核酸序列分析表明,X株與H52、H120、M41、BEAU和澳大利亞T株的核苷酸序列的同源性分別為75.8％、76.1％、76.3％、75.5％和76.9％,X株與上述5個標(biāo)準(zhǔn)株在S

2、1基因上存在較大的差異.最后以含人結(jié)核桿菌熱休克蛋白70基因全長序列的質(zhì)粒pMT-70為模板,擴增出hsp70啟動子,將其定向克隆于pUC-19,構(gòu)建成重組質(zhì)粒pY6013;然后以重組質(zhì)粒pIJK-1為模板,擴增出分枝桿菌α信號肽基因并將其克隆到pY6013質(zhì)粒中hsp70啟動子的下游,得到了大腸桿菌-分枝桿菌表達(dá)質(zhì)粒pY-α.將克隆的IBV X株S1基因經(jīng)過一系列分子生物技術(shù)手段連接到pY-α,經(jīng)限制性酶切后再連接到pRR3載體上,成

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