雞傳染性支氣管炎S1基因在大腸桿菌中的表達(dá)及其生物活性的初步鑒定.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(InfectiousBronchitisIB)是由冠狀病毒科(Coronavrindac)冠狀病毒屬(Coro-navirus)的傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種急性高度接觸性傳染病。此病在世界各地均有發(fā)生，給全球養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。S1蛋白是宿主的主要保護(hù)性抗原，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體和血凝抑制抗體，繼而使機(jī)體得到保護(hù)，并決定病毒的組織親嗜性，在病毒血清學(xué)分類(lèi)中起主要作用。在免疫學(xué)方面起著重要作用的S1

2、蛋白一直是研究的熱點(diǎn)。S1基因很容易發(fā)生變異，使IBV不斷出現(xiàn)新的血清型，使養(yǎng)殖過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)部分免疫或免疫失敗，并出現(xiàn)不同的疾病類(lèi)型。 本研究利用PCR技術(shù)將雞傳染性支氣管炎病毒S1基因分成A段和B段擴(kuò)增，并將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pGEX-6p-1原核表達(dá)載體中，酶切鑒定陽(yáng)性重組菌，并送測(cè)序公司測(cè)序。利用IPTG進(jìn)行導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示有明顯融合蛋白表達(dá)條帶和部分不完全表達(dá)蛋白條帶。通過(guò)IBV特異性抗體的Wester

3、n-blot檢測(cè)，兩段表達(dá)產(chǎn)物均能與抗體發(fā)生特異性反應(yīng)，證明表達(dá)產(chǎn)物具有部分抗原性。 將兩個(gè)重組質(zhì)粒用IPTG低溫大量誘導(dǎo)表達(dá)，收集菌體，超聲波破碎包涵體，用GlutathioneSepharose4B純化出A段和B段的GST融合蛋白。將純化得到的GST融合蛋白包被ELISA板，進(jìn)行間接ELISA試驗(yàn)，結(jié)果表明A、B兩段融合蛋白均有良好的抗原性。 將純化得到的融合蛋白加佐劑免疫家兔，連續(xù)免疫3次，將得到的抗體與200TO