雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）H52毒株病毒中和多肽的體外鑒定及S基因的克隆.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(Avianinfectiousbronchitis，IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(Avianinfectiousbronchitisvirus，IBV)引起的一種雞的急性、高度接觸性傳染的病毒性疾病。該病自從1931年被報(bào)道以來，已由最初的呼吸型逐漸演變?yōu)槟I型、腺胃型等各種類型。IBV至少包括29種血清型，并且新的血清型和變異株仍在不斷出現(xiàn)。不同血清型之間的交叉保護(hù)差異較大。病毒中和多肽的鑒定能為防制病毒感染及研究病

2、毒與宿主相互作用提供理論指導(dǎo)。 噬菌體展示(phagedisplay)是一種將基因表達(dá)產(chǎn)物和親和選擇相結(jié)合的技術(shù)。它將目的基因與噬菌體外殼蛋白基因融合表達(dá)并展示在噬菌體表面，由于所展示多肽或蛋白質(zhì)可保持相對(duì)獨(dú)立的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，因而被廣泛用于鑒定抗原或抗體表位、受體或配體功能區(qū)等。 本研究使用純化的雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)，從12肽噬菌體展示隨機(jī)肽庫中篩選特異性結(jié)合多肽。經(jīng)過四輪淘篩，得到10個(gè)陽性噬菌體，通過

3、測序與同源性分析，發(fā)現(xiàn)所有陽性噬菌體均包括一個(gè)含有組氨酸和絲氨酸的結(jié)構(gòu)域“HHXHXS”，其中X可為多種氨基酸，在H與S之間間隔的氨基酸數(shù)目不等。 進(jìn)一步對(duì)陽性噬菌體的血凝抑制活性及病毒中和特性進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)所有陽性噬菌體均能特異性抑制IBV對(duì)雞紅細(xì)胞的血凝活性，并能特異性中和IBV對(duì)HeLa細(xì)胞的感染。人工合成其中一條中和效價(jià)最高的線性多肽“N-GSHHRHVHSPFVC”，細(xì)胞中和試驗(yàn)證實(shí)該多肽同樣具有病毒中和特性，其中和滴

4、度為0.025μM。盡管該多肽在本動(dòng)物組織與細(xì)胞的病毒中和作用有待進(jìn)一步鑒定，但以上結(jié)果為鑒定病毒中和表位、探討抗病毒藥物、研究病毒與受體的相互作用及開發(fā)病毒診斷新方法等奠定了重要基礎(chǔ)。 IBV的纖突蛋白(Spike，S)蛋白與病毒入侵細(xì)胞、病毒細(xì)胞嗜性、病毒中和反應(yīng)等直接相關(guān)。本研究通過RT-PCR從IBV感染雞胚尿囊液中擴(kuò)增到全長S基因，通過測序及序列比較分析證明，該基因與呼吸型IBV代表毒株IBVM41株(GenBanka