雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）結構蛋白基因的克隆、表達及應用研究.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(IB)是由傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病，已成為養(yǎng)雞業(yè)中危害最大的病毒性傳染病之一。IBV不具有血凝性，因此無法利用血凝抑制試驗來檢測感染或免疫后動物體內(nèi)IBV抗體。雞體內(nèi)IBV抗體的檢測具有以下作用：1、對雞體內(nèi)IBV母源抗體的檢測可以為確定適當?shù)拿庖邥r間提供依據(jù)；2、對免疫后雞群血清IBV抗體水平檢測可以評估免疫效果；3、對雞血清IBV抗體水平的檢測也可以作為IB診斷的輔助手段。有報道

2、利用氣管環(huán)中和試驗檢測IBV抗體，但該試驗費時、費力，難以廣泛推廣。酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)以其敏感、客觀、成本低廉等優(yōu)點，在傳染病的診斷、抗體檢測等方面得到了廣泛地運用。目前，國外已有商品化的IBV抗體檢測試劑盒，但該試劑盒是以滅活IBV為包被抗原，需要大量地培養(yǎng)IBV病毒，存在散毒的潛在危險，而且有關的IBV純化試驗表明，IBV在離心純化過程中，病毒粒子容易破碎，冠極易丟失，不易得到完整的IBV病毒抗原。為解決以上問題，本實驗

3、設計通過基因工程方法表達病毒結構蛋白基因，利用重組結構蛋白代替全病毒作為ELISA檢測包被抗原，建立檢測IBV血清IgG抗體和眼淚IgA抗體的方法，為檢測IBV抗體提供依據(jù)。 1.克隆了IBVM41毒株N基因和IBVH52毒株S1基因，對它們進行了序列測定和與GenBank中收錄的IBVN基因、S1基因序列進行了比較分析，并用ClustalX和Mega軟件將N基因、S1基因與公布的標準序列做同源性比較和系統(tǒng)進化分析。 2

4、.在原核系統(tǒng)中表達了IBVN結構蛋白基因和S1結構蛋白基因的一個抗原表位片斷基因，并利用純化得到的重組蛋白建立間接ELISA方法，對雛雞血清和眼淚中的母抗和對人工感染IBVM41雛雞血清和眼淚中的抗體進行了檢測，通過相關性分析，表明重組N蛋白是理想的檢測用抗原，具有較好的特異性和敏感性，S1多肽的一個片斷也可做檢測用抗原，但特異性較差。 3.許多病原體通過胃腸道、呼吸道、泌尿生殖道粘膜侵入動物機體，因此，有效的粘膜免疫在抵抗這類