豬肉中一株鼠傷寒沙門(mén)菌的分離鑒定及其生物學(xué)特性分析.pdf

1、沙門(mén)菌（Salmonella）是腸道致病菌，是人和動(dòng)物最主要的食源性病原菌之一。世界衛(wèi)生組織將其列入具有嚴(yán)重危害和中等危害的食源性病原菌。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在世界各國(guó)的細(xì)菌性食物中毒中，沙門(mén)菌常列榜首。我國(guó)內(nèi)陸地區(qū)的細(xì)菌性食物中毒中有70％～80％的是由沙門(mén)菌引起的，其中90％來(lái)源于被污染的肉類(lèi)食品。豬肉是我國(guó)的主要?jiǎng)游镌葱允称?，屠宰過(guò)程中的沙門(mén)菌污染是引起豬肉食品安全問(wèn)題的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。因此，研究屠宰過(guò)程中沙門(mén)菌的污染狀況及其致病機(jī)理具有重要意

2、義。
　　基于以上分析，本研究從揚(yáng)州市某屠宰場(chǎng)豬肉胴體分離出了一株鼠傷寒沙門(mén)菌(S.typhimurium)菌株，并對(duì)其生物學(xué)特性和宿主細(xì)胞對(duì)其感染早期的應(yīng)答情況進(jìn)行了分析，為控制和預(yù)防沙門(mén)菌病提供了重要參考。
　　1.一株鼠傷寒沙門(mén)菌的分離與鑒定
　　豬肉屠宰環(huán)節(jié)的沙門(mén)菌污染是引起食物中毒的主要原因之一。本實(shí)驗(yàn)從揚(yáng)州市某屠宰場(chǎng)豬肉胴體進(jìn)行采樣，分離出了一株沙門(mén)菌菌株，通過(guò)生化鑒定及血清型分析，判斷該菌株為鼠傷寒沙門(mén)菌

3、。藥物敏感性分析表明，該菌株對(duì)氨芐青霉素高度耐藥，而對(duì)頭孢類(lèi)等藥物敏感。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腹腔注射5×105cfu/只的劑量即可致死小鼠。1×104cfu/只的劑量感染后，雖然不能致死小鼠，但能明顯地引起肝臟和脾臟的病理?yè)p傷和炎癥反應(yīng)，臟器系數(shù)明顯升高;另外，細(xì)菌在小鼠體內(nèi)的定殖能力較強(qiáng)，感染后第一周即達(dá)到最高值，之后逐漸降低，四周以后肝臟和脾臟中仍能分離到;此外，相對(duì)于對(duì)照組，肝勻漿中丙二醛水平顯著升高(P＜0.01)，而超氧化物歧化

4、酶的水平在感染后第一周明顯升高(P＜0.01)，之后逐漸降低;小鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶明顯高于對(duì)照組（P＜0.01），而堿性磷酸酶、總蛋白和白蛋白水平明顯低于對(duì)照組(P＜0.01);除此之外，血清中細(xì)胞因子（干擾素-γ、腫瘤壞死因子和單核細(xì)胞趨化蛋白-1）的分泌增加;并且，該菌株能誘導(dǎo)脾臟中T淋巴細(xì)胞的活化。通過(guò)以上分析，對(duì)該菌株的生物學(xué)特性有了初步的了解。
　　2.利用流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠中性粒細(xì)胞和B細(xì)胞對(duì)沙門(mén)菌感染早期

5、的應(yīng)答
　　沙門(mén)菌是兼性胞內(nèi)菌，可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，從而在宿主細(xì)胞內(nèi)存活，使機(jī)體長(zhǎng)期帶菌，這給動(dòng)物和人類(lèi)健康帶來(lái)了嚴(yán)重威脅。目前，關(guān)于沙門(mén)菌與宿主細(xì)胞相互作用的研究大部分以巨噬細(xì)胞為對(duì)象，而對(duì)其他宿主細(xì)胞的研究則相對(duì)較少。本研究選取了中性粒細(xì)胞(Neutrophilic granulocyte，NG)和B細(xì)胞作為研究對(duì)象，通過(guò)體外感染鼠傷寒沙門(mén)菌分離株，動(dòng)態(tài)分析了兩種細(xì)胞在沙門(mén)菌感染初期的應(yīng)答情況。結(jié)果表明，分離的NGs(Gr-

6、1+)和B細(xì)胞(B220+)均為圓形，非貼壁生長(zhǎng)。感染NGs后，凋亡NGs所占比例略有升高，但差異不顯著，而壞死細(xì)胞明顯增多，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，壞死細(xì)胞所占比例呈上升趨勢(shì)，細(xì)胞內(nèi)活性氧水平、線(xiàn)粒體膜電位、鈣離子濃度等均有所升高，細(xì)胞表面分子(CD80、CD86)的表達(dá)上調(diào)，說(shuō)明NGs啟動(dòng)了吞噬殺傷和抗原提呈作用。而感染B細(xì)胞后，相對(duì)于對(duì)照組，未見(jiàn)明顯的細(xì)胞凋亡和死亡現(xiàn)象發(fā)生，除了鈣離子濃度升高外，活性氧、線(xiàn)粒體膜電位和CD86的表達(dá)均下降