豬肉中一株鼠傷寒沙門菌的分離鑒定及其生物學特性分析.pdf

1、沙門菌（Salmonella）是腸道致病菌，是人和動物最主要的食源性病原菌之一。世界衛(wèi)生組織將其列入具有嚴重危害和中等危害的食源性病原菌。據(jù)統(tǒng)計，在世界各國的細菌性食物中毒中，沙門菌常列榜首。我國內(nèi)陸地區(qū)的細菌性食物中毒中有70％～80％的是由沙門菌引起的，其中90％來源于被污染的肉類食品。豬肉是我國的主要動物源性食品，屠宰過程中的沙門菌污染是引起豬肉食品安全問題的關鍵環(huán)節(jié)之一。因此，研究屠宰過程中沙門菌的污染狀況及其致病機理具有重要意

2、義。
　　基于以上分析，本研究從揚州市某屠宰場豬肉胴體分離出了一株鼠傷寒沙門菌(S.typhimurium)菌株，并對其生物學特性和宿主細胞對其感染早期的應答情況進行了分析，為控制和預防沙門菌病提供了重要參考。
　　1.一株鼠傷寒沙門菌的分離與鑒定
　　豬肉屠宰環(huán)節(jié)的沙門菌污染是引起食物中毒的主要原因之一。本實驗從揚州市某屠宰場豬肉胴體進行采樣，分離出了一株沙門菌菌株，通過生化鑒定及血清型分析，判斷該菌株為鼠傷寒沙門菌

3、。藥物敏感性分析表明，該菌株對氨芐青霉素高度耐藥，而對頭孢類等藥物敏感。動物實驗結果表明，腹腔注射5×105cfu/只的劑量即可致死小鼠。1×104cfu/只的劑量感染后，雖然不能致死小鼠，但能明顯地引起肝臟和脾臟的病理損傷和炎癥反應，臟器系數(shù)明顯升高;另外，細菌在小鼠體內(nèi)的定殖能力較強，感染后第一周即達到最高值，之后逐漸降低，四周以后肝臟和脾臟中仍能分離到;此外，相對于對照組，肝勻漿中丙二醛水平顯著升高(P＜0.01)，而超氧化物歧化

4、酶的水平在感染后第一周明顯升高(P＜0.01)，之后逐漸降低;小鼠血清中谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶明顯高于對照組（P＜0.01），而堿性磷酸酶、總蛋白和白蛋白水平明顯低于對照組(P＜0.01);除此之外，血清中細胞因子（干擾素-γ、腫瘤壞死因子和單核細胞趨化蛋白-1）的分泌增加;并且，該菌株能誘導脾臟中T淋巴細胞的活化。通過以上分析，對該菌株的生物學特性有了初步的了解。
　　2.利用流式細胞術分析小鼠中性粒細胞和B細胞對沙門菌感染早期

5、的應答
　　沙門菌是兼性胞內(nèi)菌，可以通過調(diào)節(jié)細胞功能，從而在宿主細胞內(nèi)存活，使機體長期帶菌，這給動物和人類健康帶來了嚴重威脅。目前，關于沙門菌與宿主細胞相互作用的研究大部分以巨噬細胞為對象，而對其他宿主細胞的研究則相對較少。本研究選取了中性粒細胞(Neutrophilic granulocyte，NG)和B細胞作為研究對象，通過體外感染鼠傷寒沙門菌分離株，動態(tài)分析了兩種細胞在沙門菌感染初期的應答情況。結果表明，分離的NGs(Gr-

6、1+)和B細胞(B220+)均為圓形，非貼壁生長。感染NGs后，凋亡NGs所占比例略有升高，但差異不顯著，而壞死細胞明顯增多，隨著時間的延長，壞死細胞所占比例呈上升趨勢，細胞內(nèi)活性氧水平、線粒體膜電位、鈣離子濃度等均有所升高，細胞表面分子(CD80、CD86)的表達上調(diào)，說明NGs啟動了吞噬殺傷和抗原提呈作用。而感染B細胞后，相對于對照組，未見明顯的細胞凋亡和死亡現(xiàn)象發(fā)生，除了鈣離子濃度升高外，活性氧、線粒體膜電位和CD86的表達均下降