一株蝗蟲病原菌的分離鑒定及其毒力研究.pdf

1、蝗蟲是一種世界性的害蟲，是農(nóng)作物和其他植物的害蟲，對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)構(gòu)成嚴(yán)重的威脅?；认x的防治已成為一項(xiàng)非常緊迫的任務(wù)?；瘜W(xué)殺蟲劑在大量而長期的使用過程中暴露出了許多缺點(diǎn)：污染環(huán)境，害蟲產(chǎn)生抗藥性，破壞生態(tài)平衡等。作為一種防治農(nóng)林害蟲的新技術(shù)手段，微生物農(nóng)藥在世界范圍內(nèi)受到廣泛重視?；认x微孢子蟲(Nosema Iocustae)是我國研究生物防治方法控制蝗害的第一個(gè)成功例子。利用昆蟲病源真菌包括白僵菌(Beauveria bassiana)、綠

2、僵菌(Metarhizium anisopliae)、和黃綠僵菌(Maxtrhizium flavoviride)等開發(fā)的真菌滅蝗劑對(duì)蝗蟲有較好的防治效果。除此之外，由昆蟲病源細(xì)菌類產(chǎn)堿假單孢菌(pseudomonas pseudoalcaligenes)，蠟狀芽孢桿菌(bacillus cereus)等制成的殺蝗劑也有一定的防治效果。但至目前，蝗害未能從根本上得到控制。開發(fā)新的微生物資源，研制成更加有效的殺蝗劑仍舊是微生物農(nóng)藥發(fā)展的一

3、個(gè)重要方向。 本文從自然病死全身發(fā)黑蝗蟲蟲尸中成功分離到一株蝗蟲病原菌，命名為hb；用分離菌株純培養(yǎng)物感染健康蝗蟲，回復(fù)感染原宿主后的病死蟲病癥與以前相同，并從回復(fù)感染致死的蟲尸中重新分離到了相同的病原菌，其致病性為科赫定律所證實(shí)；分別用液體石蠟法、甘油速凍保藏法和液氮法保藏分離菌株，供后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。為了對(duì)該菌株滅蝗效果作定量檢測(cè)，本文作了室內(nèi)毒力測(cè)定試驗(yàn)：用菌株hb發(fā)酵液口服感染健康蝗蟲，記錄死亡情況，觀察病死蟲病癥，并收集具

4、有典型死亡特征的蟲體。對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS(V11.0)，以校正死亡率值法求毒力回歸方程，得到毒力回歸方程Y=1.199X-9.745，致死中濃度為LC<,50>=1.33×10<'8>cfu/mL，相關(guān)系數(shù)R=0.9158。 通過喂食感染家蠶測(cè)定了該菌對(duì)鱗翅目昆蟲的殺蟲活性。結(jié)果表明，該菌對(duì)鱗翅目的昆蟲沒有毒殺作用，可以初步將該目昆蟲列在該菌殺蟲譜之外。 為了初步探討所分離蝗蟲病原菌殺蟲作用機(jī)理

5、，本文利用蛋白酶K水解消化蛋白質(zhì)作用，在發(fā)酵菌液上清中加入蛋白酶K使其中酶失活，再噴霧到玉米苗上喂食感染蝗蟲，觀察并記錄死亡情況。試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)。蛋白酶K對(duì)菌株殺蟲效果有明顯的抑制作用。據(jù)此，可以初步確定殺蟲物質(zhì)是該菌產(chǎn)生的一種胞外蛋白。 為了確定該菌在分類學(xué)上的地位，本文對(duì)強(qiáng)毒株hb進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定，采用細(xì)菌16SrDNA通用引物，用PCR技術(shù)擴(kuò)增出目的片段細(xì)菌的保守序列16SrDNA，將目的片段連接到pTA2-T載體上，轉(zhuǎn)