一株綠粘帚霉對(duì)植物病原菌的拮抗作用及抗菌活性成分分離鑒定.pdf

1、本研究以安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物防治省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的一株具有較高抑菌活性的綠粘帚霉RCEF4099菌株的次生代謝產(chǎn)物為研究對(duì)象，系統(tǒng)研究了RCEF4099菌株發(fā)酵液的抗菌活性與抗菌成分。主要內(nèi)容包括：菌株部分生物學(xué)指標(biāo)測(cè)定；抑菌試驗(yàn)；有利于活性成分產(chǎn)生的發(fā)酵條件優(yōu)化；菌株抑菌機(jī)理初探；室內(nèi)盆栽試驗(yàn)；活性物質(zhì)的分離與結(jié)構(gòu)鑒定。
　　 對(duì)RCEF4099菌株的生長(zhǎng)速度和幾丁質(zhì)酶活性進(jìn)行了測(cè)定。通過(guò)測(cè)定菌株RCEF4099的直徑，可以看出菌

2、落的生長(zhǎng)速度較快，其中第四天的生長(zhǎng)速度最快，第五天直徑即達(dá)到了9cm。共測(cè)定8天菌株RCEF4099的幾丁質(zhì)酶活性，幾丁質(zhì)酶在第2天開(kāi)始表達(dá)，第7天達(dá)到高峰，之后開(kāi)始下降。
　　 綠粘帚霉菌株RCEF4099分別與辣椒灰霉、小麥赤霉、玉米小斑、小麥紋枯、棉花枯萎、蘋(píng)果炭疽、油菜菌核、水稻紋枯8種植物病原真菌進(jìn)行對(duì)峙試驗(yàn)和杯碟法抑菌試驗(yàn)。綜合兩種抑菌實(shí)驗(yàn)方法，得出綠粘帚霉RCEF4099對(duì)辣椒灰霉的抑菌效果最好。
　　 本

3、研究以抑菌活性為指標(biāo)（抑菌圈大?。容^不同的營(yíng)養(yǎng)性因素包括碳氮源、無(wú)機(jī)鹽及不同的非營(yíng)養(yǎng)因素包括種齡、接種量、裝液量、搖瓶的轉(zhuǎn)速對(duì)活性物質(zhì)產(chǎn)生的影響，最終篩選出RCEF4099菌株產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)的最佳發(fā)酵條件如下：RCEF4099在裝液量40/100 ml（V/V），接種量10％（V/V），培養(yǎng)時(shí)間5d，搖床轉(zhuǎn)速160 r/min時(shí)活性最強(qiáng)；發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為：4％葡萄糖、0.5％白砂糖、1.5％干酵母、0.02％K2HPO4。

4、>　　 對(duì)RCEF4099菌株發(fā)酵液的穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果表明菌株轉(zhuǎn)接6代之前，活性穩(wěn)定，第10代的抑菌圈直徑僅比出發(fā)菌株減少了1.7mm。RCEF4099菌株發(fā)酵液有較好的熱穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性。
　　 通過(guò)粘帚霉發(fā)酵液對(duì)辣椒灰霉的孢子和菌絲生長(zhǎng)形態(tài)兩方面的影響來(lái)探尋綠色粘帚霉RCEF4099的抑菌機(jī)理。RCEF4099菌株的代謝產(chǎn)物對(duì)辣椒灰霉病菌孢子的萌發(fā)有極強(qiáng)的抑制作用，經(jīng)處理后孢子萌發(fā)畸形的比率較高，對(duì)病原菌的菌絲也同樣有致畸

5、作用。
　　 室內(nèi)盆栽實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：RCEF4099菌株發(fā)酵液對(duì)辣椒灰霉病有較高的保護(hù)和治療作用，預(yù)防作用和治療作用都在76％以上。
　　 通過(guò)比較不同提取方法的處理及相關(guān)理化試驗(yàn)，確立了活性物質(zhì)的最佳提取工藝為：發(fā)酵液50℃濃縮至原體積的1/5，加入3倍體積95％乙醇（乙醇終濃度為75％）醇沉兩次，棄沉淀并脫醇后，以丙酮為萃取試劑，按2：1的體積比分兩次萃取，取丙酮相，濃縮至干，即得到活性物質(zhì)的粗提品。