鴨沙門氏菌弱毒株的選育及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、本研究試圖選育一株鴨源沙門氏菌弱毒株作為防控鴨沙門氏菌病的候選疫苗。從川渝地區(qū)種鴨場分離鑒定的沙門氏菌中篩選出一株流行率高、毒力較強(qiáng)的沙門氏菌作為原始菌株，對其進(jìn)行紫外—亞硝基胍復(fù)合誘變，通過對雛鴨半數(shù)致死量的測定篩選出一株毒力減弱的誘變菌株，并對其生物學(xué)特性進(jìn)行研究。結(jié)果如下:
　　1.原始菌株篩選結(jié)果:共篩選出30株玻板凝集反應(yīng)最明顯的沙門氏菌，按菌體抗原分，O7占16株（第一相鞭毛抗原皆為H1,(V)），O8占8株，O4占6

2、株，從O7中選出毒力較強(qiáng)的一株作為原始菌株，其血清型為6，7∶1，(V)∶enx，即波恩沙門氏菌。
　　2.紫外、亞硝基胍各自最佳誘變條件篩選結(jié)果:原始菌株菌懸液(1×108 CFU/ml)經(jīng)波長為254 nm的紫外線在距離為20 cm的垂直高度下攪拌照射15s與在加入亞硝基胍使其最終濃度達(dá)0.5 mg/ml于37℃、100 r/min的搖床中作用30 min兩種處理，均可使原始菌死亡率達(dá)80～90％，以此作為各自最佳誘變劑量進(jìn)行

3、復(fù)合誘變。
　　3.誘變菌株毒力變化:原始菌株對一周齡雛鴨的LD50為7.4×107，而誘變菌株對一周齡雛鴨的LD50為3.9×108，是原始菌株的5.2倍，即誘變菌株的毒力下降至原始菌株的1/5。
　　4.誘變菌株的生物學(xué)特性:誘變菌株的血清型與原始菌株一致;通過體外培養(yǎng)35代，其菌落和鏡下形態(tài)保持恒定，說明誘變菌株可以穩(wěn)定遺傳，雖然體外培養(yǎng)35代后誘變株毒力略有下降，但變化在95％可信區(qū)間內(nèi)，即誘變菌株體外傳代其毒力穩(wěn)定

4、;生化試驗結(jié)果基本與原菌株一致。兩者差異在于:誘變菌株在平板上形成的菌落比原始菌株形成的菌落要小，且鞭毛在固體培養(yǎng)基上不能表達(dá)，而在液體培養(yǎng)基中側(cè)可誘導(dǎo)表達(dá)，而原始菌株不管在固體還是液體培養(yǎng)基上都能表達(dá);通過提取原始菌株與誘變菌株的基因組并利用特異性引物對其Ⅰ相鞭毛基因fliC進(jìn)行PCR擴(kuò)增，兩者均能擴(kuò)增出相同的條帶，鞭毛表達(dá)異?？赡芘cⅠ相鞭毛的調(diào)控基因發(fā)生突變有關(guān);誘變菌株通過口服和肌注免疫鴨只，二免過后均能檢出高滴度的中和抗體，肌注