禽病原性大腸菌ompA、ompT基因和腸炎沙門氏菌ompA、pgtE基因突變株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、禽病原性大腸桿菌o m p A 、o m p T 基因和腸炎沙門氏菌o m p A 、p g t E 基因突變株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究C o n s t r u c t i o na n d c h a r a c t e r i z a t i o no f o m p A 、o m p T m u t a n t so f a v i a np a t h o g e n i c E s c h e r i c h i a c o

2、 l ia n d o m p A 、p g t E m u t a n t so fS a l m o n e l l ae n t e r i t i d i s本文受國家自然科學(xué)基金( 3 0 9 7 2 1 9 6 、3 0 7 7 1 6 0 4 、3 0 4 7 1 2 8 1 ) 、國家8 6 3 計劃( 2 0 0 3 A A 2 2 2 1 4 1 ) 資助研究生：周業(yè)菲專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師：高崧教授劉秀梵教授揚州大學(xué)

3、獸醫(yī)學(xué)院2 0 1 3 年6 月摘 要完整閱讀框插入表達(dá)載體p G E X ．6 P ．1 中，通過電轉(zhuǎn)化突變株來篩選獲得回復(fù)株。P C R 擴(kuò)增帶酶切位點的o m p A 基因并插入到p M D @ 1 8 ．Ts i m p l e v e c t o r 載體中，篩選出陽性重組子T - o m p A ，然后運用分子克隆方法將Z e o c i n 抗性基因插入到目的基因o m p A 中，構(gòu)建出帶Z e o c i n 抗性基因

4、的質(zhì)粒T - o m p A ．Z e o 。P C R 擴(kuò)增出片段o m p A ．Z e o ，并電轉(zhuǎn)化入帶有質(zhì)粒p K D 4 6 的禽病原性大腸桿菌分離株E 0 5 8 中，運用同源重組的方法，篩選出基因突變株E 0 5 8 A o m p A 。運用相同的同源重組方法，依次篩選出基因突變株E 0 5 8 A o m p T 、C V C C 3 3 7 8 A o m p A 、C V C C 3 3 7 8 A p g t

5、E 。R T - P C R 結(jié)果表明各突變株基因的缺失只影響突變基因本身的表達(dá)，而其上下游基因的轉(zhuǎn)錄正常；生長曲線的測定結(jié)果顯示，各突變株、回復(fù)株的生長速度與親本株相似，并未表現(xiàn)出明顯差異；S P F 雞血清殺菌試驗、H D ．1 1 細(xì)胞吞噬試驗、1 日齡S P F 雞致死試驗結(jié)果說明，與野生株E 0 5 8 和C V C C 3 3 7 8 相比，突變株E 0 5 8 A o m p A 、E 0 5 8 A o m p T 、C