減毒鼠傷寒沙門菌ΔcrpΔcyaΔasdSL1344缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性.pdf

1、沙門菌是一種胞內(nèi)菌，既可以作為原核質(zhì)粒的表達(dá)載體，也可以作為真核質(zhì)粒的表達(dá)載體。其不僅具有制備簡(jiǎn)單、免疫方便、有較強(qiáng)的免疫原性等優(yōu)勢(shì)，而且其誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)更強(qiáng)更持久。鼠傷寒沙門菌作為沙門菌載體的研究應(yīng)用比較廣泛，但以其為載體攜帶外源抗原表達(dá)外源基因時(shí)，由于生存壓力，其所攜帶的外源基因可能不能穩(wěn)定遺傳。最近研究的一種無抗性的宿主載體平衡致死系統(tǒng)為高效表達(dá)外源基因且無抗性標(biāo)記提供了解決途徑。asd(aspartic semialdehyde

2、 dehydrogenase)基因編碼天冬氨酸β-半乳糖脫氫酶，該酶是合成二氨基庚二酸(diaminopimelic acid, DAP)的必需酶，在無外源DAP條件下，含asd基因的載體會(huì)與缺失 asd基因的減毒菌株互補(bǔ)結(jié)合，否則，減毒菌株會(huì)溶菌死亡。研究?jī)?nèi)容主要包括：
　　1.鼠傷寒沙門菌crpcyaasdSL1344缺失株的構(gòu)建及篩選
　　以含有重組自殺性質(zhì)粒χ7213(pREΔasd)為供體菌，crpcyaSL134

3、4為受體菌，利用重組自殺性質(zhì)粒介導(dǎo)細(xì)菌基因等位交換的作用，兩步法篩選出蔗糖抗性（SUCr）及DAP依賴菌落，并通過PCR及測(cè)序鑒定，確定構(gòu)建成功。
　　2.缺失株ΔcrpΔcyaΔasdSL1344與其它菌株生物學(xué)特性的比較研究
　　缺失株ΔcrpΔcyaΔasdSL1344的血清型與親本株crpcyaSL1344及強(qiáng)毒株SL1344相同，均為1,4,5,12:i:1,2；缺失株ΔcrpΔcyaΔasdSL1344能穩(wěn)定遺傳

4、缺失后的 asd基因；缺失株ΔcrpΔcyaΔasdSL1344的生化特性及生長(zhǎng)速度與強(qiáng)毒株SL1344相比有很大差異，但與親本株ΔcrpΔcyaΔasdSL1344基本保持一致，缺失株ΔcrpΔcyaΔasdSL1344失去了利用麥芽糖、乳糖、山梨醇等碳源的能力，也不能分解 H2S、半乳糖和鼠李糖，但仍保留了利用葡萄糖的能力，缺失株ΔcrpΔcyaΔasdSL1344的生長(zhǎng)速度比強(qiáng)毒株更加緩慢，但與親本株ΔcrpΔcyaΔasdSL1