抗沙門氏菌IgY抗體的制備及其特性分析.pdf

1、目的：
　　沙門氏菌是一大群寄生于人類和動物腸道中的革蘭氏陰性菌，屬于腸道菌群，是引起人類腹瀉的主要病原體。卵黃免疫球蛋白IgY(Immunoglobulin yolk)，也稱為卵黃抗體。在結(jié)構(gòu)和免疫特性上不同于哺乳動物的免疫球蛋白IgG，與IgG相比具有物理化學(xué)穩(wěn)定等多種優(yōu)點(diǎn)。因此，IgY作為替代傳統(tǒng)哺乳動物抗體的潛力受到廣泛的關(guān)注。本文用減毒沙門氏菌作為抗原免疫母雞制備成抗沙門氏菌的IgY(AS-IgY)，并對其理化性質(zhì)和生物

2、學(xué)活性進(jìn)行分析，這為沙門氏菌的治療和預(yù)防性抗體的研制奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1．免疫原為減毒沙門氏菌菌株Ty21a型，為沙門氏菌K抗原類。
　　2．6月齡雌性健康產(chǎn)蛋京白雞，體重1300±100g，每周產(chǎn)蛋5-6枚，正常飼養(yǎng)1周后免疫。
　　3．用減毒沙門氏菌菌株Ty21a作為抗原，按照109個細(xì)胞/只雞免疫進(jìn)行接種；初次免疫時加入等量的福氏完全佐劑，分別于雙翅膀皮下、左右背部皮下進(jìn)行點(diǎn)注射。以后每2周免疫1

3、次，共3次，但不加佐劑，劑量、部位同初次免疫。末次免疫后，每2個月強(qiáng)化免疫1次，使抗體維持在一個較高的水平。免疫1周后，收集雞蛋并做好標(biāo)記，4℃保存?zhèn)溆谩?br>　　4．收集免疫前及免疫后第15、20、25、30、35、40、45天的雞蛋為研究對象。AS-IgY抗體的純化采用去除蛋清，收集卵黃液經(jīng)過蒸餾水粗提，50％飽和硫酸銨鹽析，透析、以及聚乙二醇濃縮等步驟得到純化的IgY抗體。
　　5．通過蛋白質(zhì)定量后，再經(jīng)過SDS-PAGE

4、、Western blot和ELISA等方法對所純化抗體的特性進(jìn)行鑒定。
　　6．通過體外抑菌實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其生物學(xué)活性。
　　結(jié)果：
　　免疫后10天左右，即可從卵黃中檢測出特異性IgY抗體，30天左右抗體量達(dá)到高峰，每個卵黃可提取100～200mg抗體。該抗體具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性和耐酸性，效價可持續(xù)2～6個月。還原性SDS-PAGE顯示該抗體呈現(xiàn)兩條帶，分子量約20KD和70KD。ELISA結(jié)果顯示，IgY與鏈球菌、白色念

5、珠菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等其他抗原之間無交叉反應(yīng)，并可在體外抑制沙門氏菌的生長。
　　結(jié)論：
　　1．已成功制備出高純度的抗沙門氏菌IgY抗體（AS-IgY）。
　　2．通過SDS-PAGE、Western blot以及ELISA等對其理化性質(zhì)的分析結(jié)果表明，此抗體是一種耐酸、耐熱、產(chǎn)量高并且制備簡便的新型抗體。
　　3．AS-IgY抗體在體外能夠抑制沙門氏菌的生長，與無關(guān)抗原無交叉反應(yīng)。
　　4．A