沙門氏菌的耐藥性分析及PFGE分型.pdf

1、本研究對從貴州省收集到的42株食源性和醫(yī)源性疑似沙門氏菌在生化鑒定的基礎(chǔ)上進(jìn)行了血清學(xué)分型、藥敏試驗(yàn)和耐藥基因分析，比較兩種不同來源沙門氏菌耐藥性、耐藥基因型特征之間的異同，為有效遏制沙門氏菌的耐藥和優(yōu)化抗菌素的合理應(yīng)用提供依據(jù)，并使用XbaⅠ酶切、脈沖場凝膠電泳(PFGE)分型技術(shù)對沙門氏菌進(jìn)行遺傳相關(guān)性分析，確定沙門氏菌分離株之間的同源性，進(jìn)而確定疾病的傳染源、流行范圍等，為進(jìn)行沙門氏菌的分子流行病學(xué)研究及沙門氏菌引起的疾病溯源提供

2、技術(shù)基礎(chǔ)。
　　1.沙門氏菌的生化鑒定和血清學(xué)分型：采用沙門氏菌科瑪嘉顯色培養(yǎng)基分離出疑似沙門氏菌,分別用微量生化試驗(yàn)、全自動微生物鑒定系統(tǒng)（VITEK2compact）和API20E鑒定系統(tǒng)對疑似沙門氏菌進(jìn)行鑒定，對生化結(jié)果符合者進(jìn)行血清學(xué)分型，結(jié)果：所有疑似菌株皆為沙門氏菌，血清學(xué)分為傷寒、甲型副傷寒、鼠傷寒和豬霍亂沙門氏菌4種血清型。優(yōu)勢血清型為傷寒沙門氏菌和甲型副傷寒沙門氏菌,所占比例分別為45.2％（19/42）和42.

3、8%（18/42）。其中食源性分離株傷寒沙門氏菌所占比例為81.8%（9/11）最高，而醫(yī)源性分離株則以甲型副寒沙門氏菌居多，所占比例為58.1%（18/31）。
　　2.沙門氏菌的耐藥性分析：參照WHO推薦的紙片擴(kuò)散法（K-B）法對13種常用于沙門氏菌病治療的抗生素做藥敏試驗(yàn)，參考 CLSI標(biāo)準(zhǔn)(2010)對藥敏結(jié)果進(jìn)行判定，結(jié)果：檢出抗藥性菌株37株，耐藥率為88%（37/42），醫(yī)源性、食源性分離株耐藥性分別為93.5%（2

4、9/31）和72.7%（8/11），醫(yī)源性沙門氏菌分離株的抗性高于食源性。單一抗生素以萘啶酸耐藥率72%（30/42）最高，其次是吡哌酸38%（16/42）、四環(huán)素38%（16/42）、復(fù)方新諾明17%（7/42）、氨芐西林12%（5/42）和環(huán)丙沙星7%（3/42），2重耐藥沙門氏菌38%（16/42），3重耐藥沙門氏菌24%（10/42），5重耐藥沙門氏菌7.1%（3/42），未發(fā)現(xiàn)亞胺培南和左氧氟沙星抗性菌株。
　　3.沙門

5、氏菌的耐藥基因檢測：PCR擴(kuò)增42株沙門氏菌耐藥基因gyrA和parC，并進(jìn)行測序分析。所擴(kuò)增菌株均存在 gyrA基因喹諾酮抗性決定區(qū)（QRDR）的突變，耐藥基因gyrA主要的氨基酸置換模式為：Ser83→Tyr、Ser83→Phe和Asp87→Gly，3株耐5種抗生素耐藥株中有2株的parC基因發(fā)生了突變，分別是沙門氏菌（SLM(1)ZY23）的parC基因（lle29→Val、Ala66→Thr）和SLM(1)GZ02的parC基因

6、Ala66→Thr。表明parC基因是引起高水平抗性的重要因素之一。
　　4.沙門氏菌的PFGE分型分析：參照美國CDC標(biāo)準(zhǔn)對兩種不同來源的沙門氏菌進(jìn)行PFGE分型,結(jié)果顯示42株沙門氏菌基因型相似性在0.22—1.0之間，分為19種 PFGE圖譜型，相同的PFGE圖譜型在食源性和醫(yī)源性沙門菌分離株均有發(fā)現(xiàn)。11株食源性分離沙門氏菌產(chǎn)生9種PFGE圖譜型，其中有3株傷寒沙門氏菌的PFGE圖譜型相同。醫(yī)源性分離的31株沙門氏菌產(chǎn)生1