豬沙門(mén)氏菌的臨床分離鑒定及耐藥性消除研究.pdf

1、沙門(mén)氏菌（Salmonella）為腸桿菌科沙門(mén)氏菌屬成員，是一類(lèi)條件性細(xì)胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性腸桿菌，絕大多數(shù)對(duì)人和動(dòng)物有致病性，主要引起發(fā)熱、胃腸炎、腹瀉和敗血癥等，是世界上引起食物中毒最多的病原菌。由于疾病治療及抗菌素類(lèi)飼料添加劑的不斷使用，各個(gè)國(guó)家的沙門(mén)氏菌耐藥性傳播迅速，成為全球關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題。中國(guó)是養(yǎng)豬大國(guó)，因此豬沙門(mén)氏菌病應(yīng)受到特別的關(guān)注。 本研究針對(duì)沙門(mén)氏菌病臨床發(fā)病豬及多重耐藥性沙門(mén)氏菌開(kāi)展了以下工作：

2、 1．從903個(gè)臨床發(fā)病豬群中分離得到41株沙門(mén)氏菌。血清分型結(jié)果顯示，主要分布于6個(gè)血清型，但以豬霍亂和鼠傷寒兩種血清型為主，分別為21株和8株。 2．采用K-B法對(duì)分離菌進(jìn)行了19種臨床常用抗生素的耐藥性分析，結(jié)果顯示，分離株的多重耐藥性相當(dāng)嚴(yán)重，94.3％的菌株耐10種以上抗生素；除鼠傷寒沙門(mén)氏菌外，大部分血清型對(duì)丁胺卡那、氟喹諾酮類(lèi)、先鋒V及先鋒Ⅵ、痢特靈、多粘菌素B敏感；而鼠傷寒沙門(mén)氏菌僅對(duì)丁胺卡那與先鋒V、Ⅵ敏感。

3、 3．篩選出對(duì)14種抗生素具有耐藥性的鼠傷寒沙門(mén)氏菌17y，用高溫高濃度SDS處理17y，獲得了對(duì)11種抗生素敏感的17S1。 4．對(duì)17y和17S1耐藥基因進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果表明大部分耐藥基因均存在于質(zhì)粒上，隨著質(zhì)粒消除而被消除，包括：氨芐青霉素耐藥基因（blaTEM和blaOXA-1）、氯霉素耐藥基因（catl）、四環(huán)素耐藥基因（tet（B））、慶大霉素耐藥基因（aacC2）、氨基糖苷類(lèi)耐藥基因（aadA8b）、甲氧

4、芐胺嘧啶耐藥基因（dhfrXⅡ）、磺胺類(lèi)耐藥基因（sull）等。從耐藥菌中檢測(cè)到Ⅰ型整合子，也存在于質(zhì)粒上。質(zhì)粒圖譜也證實(shí)處理后細(xì)菌部分質(zhì)粒帶消失。 5．克隆測(cè)序了喹諾酮耐藥基因gyrA與parC，證明該類(lèi)基因位于染色體上。測(cè)序分析證實(shí)，gyrA第87位氨基酸由耐藥菌17y的天冬酰胺（Asn）突變?yōu)槊舾芯?7S1的天冬氨酸（Asp），表明這種突變導(dǎo)致了沙門(mén)氏菌對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥性逆轉(zhuǎn)。 6．敏感菌中未擴(kuò)增到質(zhì)粒毒力基因

5、spv與rck，說(shuō)明毒力相關(guān)質(zhì)粒被消除。 7．動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，17Sl對(duì)小鼠的毒力降低（LD<,50>增加10倍）、在小鼠體內(nèi)的增長(zhǎng)與擴(kuò)散速度顯著降低（P＜0.05）。 8．繪制了17y和17Sl的生長(zhǎng)曲線(xiàn)，結(jié)果17S1比17y提前進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。 總之，本研究闡明了沙門(mén)氏菌及其多重耐藥的流行情況，揭示了豬源沙門(mén)氏菌嚴(yán)重的多重耐藥性，其多重耐藥性對(duì)人類(lèi)健康的潛在危害應(yīng)引起重視；對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的多重耐