豬源大腸桿菌、沙門氏菌及葡萄球菌銅抗性與耐藥性的相關(guān)性研究.pdf

1、廣泛傳播的抗菌藥物耐藥基因(antibiotic resistance gene，ARG)，因其可通過食物鏈傳遞給人類引起公共衛(wèi)生風險，已引起全球關(guān)注。近幾十年來，高劑量硫酸銅等重金屬鹽和抗菌藥物因其預防動物疾病、促生長等作用被普遍添加到豬飼料中。這種做法無疑會導致抗菌藥物和重金屬隨著糞便的排放源源不斷地釋放到環(huán)境中。本研究調(diào)查、了解浙江省規(guī)?；i場抗銅菌株的發(fā)生情況，以及探討ARG與重金屬抗性基因之間可能存在的相關(guān)性，旨在保證硫酸銅促

2、生長效果的基礎上，避免耐藥性的加劇及減少環(huán)境污染，為養(yǎng)豬業(yè)飼料添加劑中銅合理劑量的選擇提供科學依據(jù)。
　　首先以臨床分離到的130株大腸桿菌、32株沙門氏菌和11株葡萄球菌為材料，采用美國臨床和實驗室標準協(xié)會(Clinical and Laboratory StandardsInstitute，CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法開展了硫酸銅對上述細菌最低抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentrations，MI

3、Cs)的測定。試驗結(jié)果表明，硫酸銅對各菌株MIC值范圍為8-10 mM。就大腸桿菌而言，49.23％(64/130)對硫酸銅的耐受高達8 mM，高于對硫酸銅耐受7 mM和9 mM的33.85％(44/130)和16.92％(22/130)。此外，仔豬大腸桿菌對硫酸銅的耐受極顯著高于出欄豬(P＜0.01)，顯著高于生長肥育豬(P口＜0.05）;針對沙門氏菌，68.75％(22/32)對硫酸銅的耐受高達8 mM，同樣高于對硫酸銅耐受7 mM

4、和9 mM的18.75％(6/32)和12.50％(4/32);而對葡萄球菌，對硫酸銅耐受為7 mM和8 mM的比例均為45.45％(5/11)，遠高于對硫酸銅耐受9mM的9.09％(1/11)。
　　其次，為進一步探索銅抗性的分子遺傳基礎及其在基因水平上與耐藥性的關(guān)系，本研究進一步采用PCR技術(shù)檢測抗銅基因(pcoABCDE)和耐藥基因（tetA、tetB、strA、strB、sul2）。試驗結(jié)果表明，同時具有pcoA、pcoB

5、、pcoC、pcoD和pcoE抗銅基因的大腸桿菌，占總檢測菌株數(shù)的31.5％(41/130);而同時具有pcoA、pcoB、pcoC、pcoD和pcoE抗銅基因沙門氏菌為59.4％(19/32)。但臨床分離的葡萄球菌均未檢測到抗銅基因(0/11)。在41株攜帶抗銅基因的大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)，同時攜帶氨基糖苷類抗生素耐藥基因(strA、strB)或磺胺類抗菌藥物耐藥基因（sul2）的大腸桿菌百分率均在90％以上，而四環(huán)素類抗生素耐藥基因(tet

6、A)只有60％左右。在19株攜帶抗銅基因的沙門氏菌中，同樣含有氨基糖苷類抗生素耐藥基因（strA、strB）的沙門氏菌百分率高達100％，四環(huán)素類抗生素耐藥基因（tetA）次之(＞70％)，磺胺類抗菌藥物耐藥基因(sul2)最低(＜20％)。
　　綜上所述，本研究提示，浙江省規(guī)模化豬場中無論是大腸桿菌、沙門氏菌還是葡萄球菌均存在不同程度的銅抗性，且三種菌的銅抗性無顯著性差異。分離自豬不同生長階段的大腸桿菌對銅的抗性大小依次為仔豬、