整合子介導(dǎo)的豬源正常菌群大腸桿菌耐藥性研究.pdf

1、大腸桿菌除小部分可致病外,大部分是動(dòng)物腸道內(nèi)正常菌群的成分之一,屬非致病性細(xì)菌。臨床應(yīng)用抗菌藥物雖對(duì)細(xì)菌性感染的防控起到了積極作用,但隨著抗菌藥物的大量和不合理應(yīng)用,病原細(xì)菌耐藥性問(wèn)題越來(lái)越突出,已成為全世界的一個(gè)難題。同時(shí),另一個(gè)尖銳問(wèn)題就是由于細(xì)菌長(zhǎng)期處于抗菌藥物選擇壓力下,非致病細(xì)菌如腸道正常菌群大腸桿菌的耐藥和多重耐藥問(wèn)題也日益加劇。
　　 采取浙江省規(guī)?；i場(chǎng)健康仔豬直腸棉拭子或新鮮糞樣,經(jīng)細(xì)菌分離純化、革蘭氏染色、生

2、化試驗(yàn)和小鼠致病性試驗(yàn)等,鑒定得到43株正常菌群大腸桿菌。通過(guò)WHO推薦的K-B法測(cè)定其對(duì)17種抗菌藥物的耐藥性。結(jié)果表明,在17種抗菌藥物中,細(xì)菌對(duì)青霉素G、氨芐青霉素、羧芐青霉素、復(fù)方新諾明、鏈霉素表現(xiàn)出很高的耐藥性,耐藥率分別為95.3％、76.7％、76.2％、74.4％和60.5％。進(jìn)一步的耐藥譜分析表明,43株正常菌群大腸桿菌菌株均對(duì)1種或多種抗菌藥物耐藥:對(duì)1～3種抗菌藥物耐藥的有8株,對(duì)4～6種和7～9種抗菌藥物耐藥的均

3、有15株,對(duì)10～11種抗菌藥物耐藥的有5株,其中對(duì)5種抗菌藥物耐藥的菌株所占比例最高,達(dá)25.6％,其次是對(duì)7種抗菌藥物耐藥的菌株有9株,占20.9％。
　　 Touch-down PCR擴(kuò)增正常菌群大腸桿菌分離株中sul基因、aada基因、gyrA基因和tetC基因,結(jié)果表明,在43株正常菌群大腸桿菌分離株中,有8株檢測(cè)出sul耐藥基因,7株檢測(cè)出aada耐藥基因,分別占檢測(cè)菌株的18.6％(8/43)和16.3％(7/43

4、)。隨機(jī)抽檢28株分離菌gyrA基因和tctC基因攜帶率,結(jié)果表明其中含gyrA基因的菌株共有11株,攜帶率為39％,但未檢測(cè)到tetC基因。相對(duì)于耐藥表型,耐sul、aada、gyrA和tetC耐藥基因在43株正常菌群大腸桿菌分離株中陽(yáng)性率的檢測(cè)偏低,提示除這些基因外,還有其他基因或因素在大腸桿菌對(duì)抗菌藥物的耐藥及多重耐藥中起重要作用。
　　 對(duì)Ⅰ型、Ⅱ型整合酶基因通過(guò)PCR體外擴(kuò)增并經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析,結(jié)果表明43株正常菌

5、群大腸桿菌有27株檢測(cè)到Ⅰ型整合酶基因,2株檢測(cè)到Ⅱ型整合酶基因,分別占檢測(cè)菌株數(shù)的62.8％和4.7％,所有Ⅰ型整合酶陽(yáng)性菌株均呈多重耐藥,最主要多重耐藥類型為氨芐青霉素+復(fù)方新諾明+羧芐青霉素等;另外,所有檢測(cè)到Ⅱ型整合酶基因的菌株也同時(shí)檢測(cè)到了Ⅰ型整合酶基因,符合率為100％,說(shuō)明1株細(xì)菌可同時(shí)攜帶多個(gè)整合子,且菌株攜帶Ⅰ型整合酶基因和Ⅱ型整合酶基因有一定相關(guān)性。
　　 經(jīng)PCR體外擴(kuò)增、瓊脂糖凝膠電泳分析,43株大腸桿菌

6、有7株為Ⅰ型整合子基因盒陽(yáng)性菌,陽(yáng)性率為16.2％;對(duì)整合子基因盒進(jìn)一步的DNA序列分析結(jié)果表明,基因盒大小共3種,其中含230bp的有1株,含1025bp的有3株,含1602bp的也有3株,插入片斷多含aadA基因和dfrA基因,分別編碼對(duì)鏈霉素和磺胺類藥物的耐藥性。耐藥基因型分析結(jié)果提示正常菌群大腸桿菌對(duì)鏈霉素和磺胺類藥物耐藥最為常見,這與耐藥表型的檢測(cè)結(jié)果基本符合。
　　 本研究結(jié)果表明,浙江省規(guī)?；i場(chǎng)正常菌群大腸桿菌Ⅰ