多抗性豬源大腸桿菌的部分耐藥性基因分析.pdf

1、大腸桿菌是醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)臨床上最常見的一種病原菌，其致病性株可引起仔豬黃痢、白痢、豬水腫等病。隨著獸醫(yī)臨床上抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，大腸桿菌耐藥菌株開始不斷出現(xiàn)，甚至出現(xiàn)多重耐藥菌株。本文主要進(jìn)行了豬源大腸桿菌臨床分離菌株的鑒定、目的菌株的部分耐藥基因檢測及AcrA基因的原核表達(dá)這三方面進(jìn)行研究，結(jié)果如下： 1)從湖南省各地采集99株病原菌株，通過形態(tài)及理化特征鑒定，確認(rèn)其中27株為大腸桿菌菌株。用臨床常用的32種抗生素對(duì)27株大腸桿菌

2、進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明，Z16株對(duì)所用抗生素均不敏感，Z01、Z08、Z12、Z27、Z34株僅對(duì)多粘菌素B敏感。 2)對(duì)Z16、Z01、Z08、Z12、Z27、Z34株采用ERIC-PCR方法進(jìn)行分型鑒定，通過比較電泳帶型得知，六個(gè)菌株具有不同的譜型。依據(jù)Z16株的耐藥譜，檢測了頭孢類、氨基糖苷類和喹諾酮類抗生素耐藥的相關(guān)基因；克隆與序列分析表明，菌株含有頭孢類hmpc酶基因型中的ACT基因型、氨基糖苷類的aph(3')-Ⅱ基

3、因和喹諾酮類的gyrh和parC基因；通過序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)gyrA和parC基因在質(zhì)粒和染色體上都有1-2個(gè)的堿基突變。提示，這些耐藥基因的存在及其堿基的變化與Z16株的耐藥水平有一定的相關(guān)性。 3)根據(jù)GenBank中發(fā)表的AcrA基因全長序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，獲得一個(gè)大小為696bp的DNA片段，再將其克隆到表達(dá)載體pET28a<'(+)>中，并轉(zhuǎn)化至宿主菌BL21(DE3)中獲得了高效表達(dá)。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，重組菌