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1、沙門(mén)氏菌(Salmonella)既可感染動(dòng)物,表現(xiàn)出敗血癥或胃腸炎,也可以感染人,引起食品中毒,因此是重要的人獸共患病原菌。由于抗生素的濫用,沙門(mén)氏菌的多重耐藥性已成為世界性關(guān)注的問(wèn)題。我國(guó)的家禽養(yǎng)殖業(yè)非常發(fā)達(dá),而沙門(mén)氏菌感染仍然是家禽生產(chǎn)過(guò)程中常見(jiàn)一個(gè)現(xiàn)象。由于沙門(mén)氏菌的流行與耐藥隨著時(shí)間和環(huán)境的變化不斷發(fā)生改變,因此有必要對(duì)沙門(mén)氏菌的流行情況和耐藥情況進(jìn)行持續(xù)跟蹤調(diào)查。本研究利用實(shí)驗(yàn)室前期建立的多重PCR方法(mPCR)對(duì)疑似沙門(mén)氏
2、菌進(jìn)行檢測(cè)鑒定,通過(guò)藥敏實(shí)驗(yàn)測(cè)定沙門(mén)氏菌的耐藥性,測(cè)定了分離株的生物被膜形成能力,分析了生物被膜和Ⅰ類(lèi)整合子與沙門(mén)氏菌耐藥性的關(guān)系,為沙門(mén)氏菌的防控提供流行病學(xué)數(shù)據(jù)支撐和理論指導(dǎo)。
1、禽沙門(mén)氏菌的分離鑒定及耐藥性分析
2014年2月至2015年7月在揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院采集病死雞、鴨、鵝等禽類(lèi)的肝臟和膽囊,無(wú)菌劃線接種麥康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng),獲得無(wú)色、透明或半透明、圓形、光滑菌落。經(jīng)mPCR鑒定,共分離鑒定出61株沙門(mén)氏菌
3、,其中鼠傷寒沙門(mén)氏菌33株,腸炎沙門(mén)氏菌3株,雞白痢沙門(mén)氏菌25株。雞源分離株主要是雞白痢沙門(mén)氏菌(22/24,91.67%),鵝源分離株主要是鼠傷寒沙門(mén)氏菌(29/33,87.88%)。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示,所分離的禽沙門(mén)氏菌普遍對(duì)青霉素、苯唑西林、利福平和萬(wàn)古霉素的耐藥率達(dá)到了100%,但對(duì)美福仙、諾氟沙星、阿米卡星、卡那霉素、氯霉素、氟苯尼考有較好的敏感性。96.72%沙門(mén)氏菌對(duì)6種及其以上抗菌藥耐藥,說(shuō)明沙門(mén)氏菌的多重耐藥性比例高。
4、
2、沙門(mén)氏菌分離株的生物被膜測(cè)定與耐藥性的關(guān)系
通過(guò)結(jié)晶紫染色定量法測(cè)定分離到的61株禽沙門(mén)氏菌生物被膜形成能力,共有54株沙門(mén)氏菌有較強(qiáng)的生物被膜形成能力(54/61,88.52%),其中,鼠傷寒沙門(mén)氏菌28株(28/33,84.84%),雞白痢沙門(mén)氏菌23株(23/25,92%),腸炎沙門(mén)氏菌3株(3/3,100%,)。選擇生物被膜形成能力強(qiáng)的雞白痢沙門(mén)氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌各3株,測(cè)定抗生素的MI
5、C和MBC。相對(duì)沙門(mén)氏菌浮游菌,生物被膜形成后阿米卡星、慶大霉素、氯霉素和氟苯尼考MIC值和MBC值提高了20倍以上。因此,絕大多數(shù)沙門(mén)氏菌可形成生物被膜,細(xì)菌在生物被膜狀態(tài)下可顯著提高其對(duì)抗生素的抵抗力。
3、禽沙門(mén)氏菌Ⅰ類(lèi)整合子的檢測(cè)及序列分析
通過(guò)遞減PCR方法測(cè)定篩選出的59株多重耐藥沙門(mén)氏菌的Ⅰ類(lèi)整合子,共擴(kuò)增出5個(gè)菌株的Ⅰ類(lèi)整合子,長(zhǎng)度約1.6 kb,其中包括4株雞白痢沙門(mén)氏菌檢出,1株腸炎沙門(mén)氏菌,而鼠
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