PCR檢測沙門氏菌方法的優(yōu)化.pdf

1、本研究從對增菌方案、DNA模板的制備、引物的選擇、PCR反應(yīng)體系、避免假陰性等方面進(jìn)行對檢測沙門氏菌的PCR技術(shù)進(jìn)行優(yōu)化，試圖建立一種最佳的檢測沙門氏菌的PCR技術(shù)。實驗結(jié)果如下： 1.使用BPW(緩沖蛋白胨水)增菌液為培養(yǎng)沙門氏菌的增菌液，37℃增菌，不振蕩培養(yǎng)8h可以達(dá)到108cfu/mL以上，可以滿足大多PCR檢測技術(shù)靈敏度(102～106cfu/mL)的要求，過多的延長增菌時間是沒有必要的；在增菌培養(yǎng)的前8h，使用選擇性

2、培養(yǎng)基和振蕩培養(yǎng)并不能提高增菌效果。這樣就建立了快速簡便的樣品增菌方案。 2.從快捷、簡便和經(jīng)濟角度考慮，熱裂解法是最佳的模板DNA制備技術(shù)。 3.引物的選擇上，以InvA基因的S139、S141引物進(jìn)行擴增，其敏感性和特異性分別達(dá)到99.4％和100％，相對于其他常用的引物檢測效果較好。 4.經(jīng)多次實驗摸索，反應(yīng)條件是模板在97℃變性7min，以保證PCR的順利進(jìn)行；復(fù)性和延伸溫度為60℃lmin；用29個循環(huán)