鴨肝炎病毒分離株的鑒定及弱毒株的選育.pdf

1、鴨病毒性肝炎是由鴨肝炎病毒引起的一種急性接觸傳染性疾病，以急性發(fā)病、病程短和高死亡率為特征。該病在我國多個地區(qū)已多次爆發(fā)，且發(fā)病嚴重，流行區(qū)域廣，損失巨大，嚴重威脅著我國的養(yǎng)鴨業(yè)。鴨肝炎可由三種不同類型的病毒引起，稱為Ⅰ型，Ⅱ型和Ⅲ型鴨肝炎病毒。我國流行的主要是Ⅰ型鴨肝炎。但近幾年來，不斷有使用Ⅰ型鴨肝炎弱毒疫苗或高免卵黃抗體進行預防或治療無效的鴨群爆發(fā)疑似鴨肝炎，懷疑為Ⅰ型鴨肝炎變異株或新型鴨肝炎。 本試驗通過番鴨胚尿囊腔接種

2、，對我省采集的2份死于疑似鴨病毒性肝炎的病鴨肝組織進行病原分離，獲得2個病毒分離株VFY株和NFY株。分離株病毒經反復凍融，氯仿抽提，超速離心后，電鏡負染均可見直徑約20～40nm的病毒粒子。對VFY株病毒的理化特性研究表明：VFY株病毒對氯仿，胰酶有抵抗力，可耐受PH3.0的酸性環(huán)境。將2株分離株經鴨胚傳至第5代，收集鴨胚尿囊液毒測定這些毒株的ELD50分別為10<'-6.52>/0.2ml，10<'-553>/0.2ml。用鴨肝炎Ⅰ

3、型弱毒苗及其血清和2株分離株進行交叉中和試驗，待檢毒株VFY，NFY株和DHVI型的相關系數(shù)分別為35.73％和0，而NFY株與VFY株的相關系數(shù)為83.8％。結果表明：VFY株為Ⅰ型DHV變異株，NFY株為新型DHV，VFY株與NFY株為同一血清型。這兩分離株對12～14日齡鴨胚的致死率為100％，人工感染1日齡雛番鴨(腿部肌肉注射)的致死率分別為60％和55.6％。死亡鴨呈角弓反張姿勢，剖檢主要可見肝臟腫大，有出血點或出血斑。

4、 以Ⅰ型DHv變異株實驗感染雛番鴨，對感染雛鴨的組織病理變化進行了觀察，結果表明：感染雛番鴨肝、腎、脾、胰、腦的組織病理變化分別表現(xiàn)為出血性、壞死性肝炎，腎小管變性及異嗜性白細胞浸潤，壞死性脾炎，胰臟的局灶性壞死及異嗜性粒細胞浸潤和神經細胞的變性壞死。 建立了間接ELISA法以檢測鴨肝炎病毒抗體滴度。病毒抗原經反復凍融離心后氯仿處理，再經Sephadex G-200分子篩層析提純獲得包被抗原，制備了陽性血清(中和效價1:99)

5、，陰性血清，酶標二抗。抗原包被量10ug/ml，酶標二抗稀釋800倍，血清稀釋25倍，臨界值為0.342，結果以能產生陽性反應的血清最高稀釋度為該血清的終點抗體滴度。 對Ⅰ型DHv變異株進行致弱選育研究。將Ⅰ型DHV變異株(VFY株)在sPF雞胚上連續(xù)傳70代(VFY-70)致弱后，經毒力返強試驗表明VFY-70在1日齡雛番鴨體內連續(xù)傳5代不出現(xiàn)毒力返強現(xiàn)象，是安全的。VFY-70稀釋成100倍，200倍，500倍后分別免疫1日

6、齡雛番鴨，對免疫的雛番鴨采血，間接ELISA法測定血清的效價，免疫雛鴨在第5天時抗體水平達到高峰，然后呈逐漸下降趨勢。同時在免疫組雛番鴨5日齡時用Ⅰ型DHV變異株強毒攻毒，觀察雛鴨的死亡情況。由結果可知，VFY70株在100倍稀釋時，保護率達100％，而500倍稀釋時，保護率只為70％。結果表明，VFY70株經過雞胚傳代致弱后在毒力下降的同時免疫原性不受影響，可以作為疫苗的候選株。本研究從病原學工作入手分析鴨肝炎病毒的致病性，在病原學工