甲型鴨肝炎病毒的分離鑒定及致病性研究.pdf

1、鴨甲型病毒性肝炎是由甲型鴨肝炎病毒（Duck Hepatitis Virus A,DHAV）引起的一種急性和高度接觸性傳染病，給我國乃至世界的養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。其病原有三個(gè)血清型，Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。2008年，基于 VP1、VP0、VP3基因序列及3D基因的部分序列將 DHV-Ⅰ分 A、B、C三個(gè)基因型，分別對應(yīng)血清Ⅰ型、臺灣新型和韓國新型。小 RNA病毒科研究小組建議在小RNA病毒科中增設(shè)禽肝炎病毒屬鴨甲型肝炎病毒種，并將血

2、清型 DHV-Ⅰ的3個(gè)基因型歸屬其中。本文將延用2008年后的分類，將引起鴨甲型病毒性肝炎的病毒歸屬于小 RNA病毒科的禽肝炎病毒屬鴨甲型肝炎病毒種，稱之為鴨甲型肝炎病毒(DHAV)，鴨甲型肝炎病毒又被分為三個(gè)基因型即A、B、C三個(gè)基因型。
　　根據(jù)GenBank中DHAV的全基因序列，設(shè)計(jì)了目的片段大小為699bp的特異性引物，用RT-PCR檢測方法對實(shí)驗(yàn)室收集的疑似鴨甲病毒性肝炎病例的病料進(jìn)行了鑒定，鑒定結(jié)果顯示病料中含有DH

3、AV-A，再通過鴨胚終點(diǎn)方法純化分離得到8株病毒。為獲得全基因組，設(shè)計(jì)了9對特異性引物，然后將獲得的目的基因送測序，用DNASTRA中的Seqman拼接，得到8株病毒的全基因組序列。遺傳進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，這8個(gè)毒株與DHAV-A的同源性為93.1％-99.6%，與臺灣變異株和韓國變異株之間的同源性在71.4%-72.2%，確定8株毒均為DHAV-A。基于基因進(jìn)化分析，又分析了6個(gè)分離毒株對雛鴨的致病性。感染雛鴨后72h每組放血處死3只，并采

4、集心、肝、脾、肺、腎、腸、胰腺、腦等器官組織，采用鴨胚滴定法進(jìn)行病毒滴定。研究結(jié)果表明在各個(gè)組織中均有病毒存在，其中在肝臟中的含量最高，在免疫器官中的含量也相對較高，并確定鴨肝炎病毒在體內(nèi)的分布情況為肝臟>脾臟>法氏囊>腸>心臟>腦>胰腺。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示各毒株的致病能力有一定的差異性，毒株DHAV-15-2、DHAV-4和DHAV-40實(shí)驗(yàn)組的病毒滴定明顯高于其他3組。得到結(jié)論證明本研究分離純化了8株DHAV-A，并完成了全基因組的測序