甲型鴨肝炎病毒的分離鑒定及致病性研究.pdf

1、鴨甲型病毒性肝炎是由甲型鴨肝炎病毒（Duck Hepatitis Virus A,DHAV）引起的一種急性和高度接觸性傳染病，給我國乃至世界的養(yǎng)鴨業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。其病原有三個血清型，Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。2008年，基于 VP1、VP0、VP3基因序列及3D基因的部分序列將 DHV-Ⅰ分 A、B、C三個基因型，分別對應(yīng)血清Ⅰ型、臺灣新型和韓國新型。小 RNA病毒科研究小組建議在小RNA病毒科中增設(shè)禽肝炎病毒屬鴨甲型肝炎病毒種，并將血

2、清型 DHV-Ⅰ的3個基因型歸屬其中。本文將延用2008年后的分類，將引起鴨甲型病毒性肝炎的病毒歸屬于小 RNA病毒科的禽肝炎病毒屬鴨甲型肝炎病毒種，稱之為鴨甲型肝炎病毒(DHAV)，鴨甲型肝炎病毒又被分為三個基因型即A、B、C三個基因型。
　　根據(jù)GenBank中DHAV的全基因序列，設(shè)計了目的片段大小為699bp的特異性引物，用RT-PCR檢測方法對實驗室收集的疑似鴨甲病毒性肝炎病例的病料進行了鑒定，鑒定結(jié)果顯示病料中含有DH

3、AV-A，再通過鴨胚終點方法純化分離得到8株病毒。為獲得全基因組，設(shè)計了9對特異性引物，然后將獲得的目的基因送測序，用DNASTRA中的Seqman拼接，得到8株病毒的全基因組序列。遺傳進化分析發(fā)現(xiàn)，這8個毒株與DHAV-A的同源性為93.1％-99.6%，與臺灣變異株和韓國變異株之間的同源性在71.4%-72.2%，確定8株毒均為DHAV-A?；诨蜻M化分析，又分析了6個分離毒株對雛鴨的致病性。感染雛鴨后72h每組放血處死3只，并采

4、集心、肝、脾、肺、腎、腸、胰腺、腦等器官組織，采用鴨胚滴定法進行病毒滴定。研究結(jié)果表明在各個組織中均有病毒存在，其中在肝臟中的含量最高，在免疫器官中的含量也相對較高，并確定鴨肝炎病毒在體內(nèi)的分布情況為肝臟>脾臟>法氏囊>腸>心臟>腦>胰腺。實驗結(jié)果還顯示各毒株的致病能力有一定的差異性，毒株DHAV-15-2、DHAV-4和DHAV-40實驗組的病毒滴定明顯高于其他3組。得到結(jié)論證明本研究分離純化了8株DHAV-A，并完成了全基因組的測序