鴨肝炎病毒分離株的鑒定及其卵黃抗體的制備.pdf

1、鴨病毒性肝炎(Duck Virus Hepatitis，DVH)是由小RNA病毒科腸病毒屬的鴨肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus，DHV)引起雛鴨的一種急性、高度致死性、烈性傳染病。其特征為病鴨痙攣、頭向背部后仰、呈角弓反張?zhí)禺愖藙?。主要病變特點(diǎn)為肝臟腫大，有大小不等的出血斑、出血點(diǎn)。鴨肝炎病毒有血清型Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型，三個(gè)型之間沒有抗原相關(guān)性。以往在我國流行的主要是Ⅰ型鴨肝炎病毒，但近幾年來，不斷有使用Ⅰ型鴨肝炎弱毒疫

2、苗或高免卵黃抗體進(jìn)行預(yù)防或治療無效的鴨群爆發(fā)疑似鴨肝炎，懷疑為新型鴨肝炎。本病在國內(nèi)雛鴨群中頻頻發(fā)生，給養(yǎng)殖戶帶來了極大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　 本試驗(yàn)對臨床患病鴨分離的一株疑似鴨肝炎病毒進(jìn)行了生物學(xué)鑒定、血清型鑒定和毒力測定。利用Ⅰ型和新型鴨肝炎病毒鑒別引物對提取的病毒RNA進(jìn)行了RT-PCR擴(kuò)增。將分離病毒分別與Ⅰ型和新型鴨肝炎病毒陽性血清進(jìn)行中和試驗(yàn)。根掘測定的病毒ELD50、LD50，進(jìn)行了雛鴨攻毒和鴨胚肝細(xì)胞接毒試驗(yàn)并用病變

3、肝臟、脾臟制作石蠟切片，觀察其組織病理特征。結(jié)果顯示：電鏡可觀察到40nm左右的圓形無囊膜病毒顆粒，該分離毒可耐受37℃30min、氯仿，pH4.0～pH9.0均不能使其喪失活性。RT-PCR擴(kuò)增出了705bp條帶與預(yù)期相符，分離病毒不能被Ⅰ型鴨肝炎病毒陽性血清中和，新型鴨肝炎病毒陽性血清對該病毒的中和效價(jià)是1∶200，該毒株的ELD50為10-5.7/0.1mL，LD50為10-6.9/0.5mL。能引起攻毒鴨與臨床病例一致的癥狀和病

4、變以及顯著的組織病理學(xué)變化和肝細(xì)胞病變，可作為新型鴨肝炎病毒的疫苗候選株開發(fā)應(yīng)用。
　　 用該毒株接種易感雛鴨，取病死鴨肝臟，制備組織滅活苗，按不同免疫程序免疫高產(chǎn)蛋雞，提取卵黃抗體。對不同免疫程序、不同卵黃抗體的提取方法以及卵黃抗體的保存方法進(jìn)行了探討。試驗(yàn)結(jié)果表明，最佳免疫程序是，首免頸部皮下注射2 mL/只，首免一周后于左側(cè)腹股溝皮下注射2.5 mL/只，首免二周后于右側(cè)腹股溝皮下注射2.5 mL/只；抗體效價(jià)從首免后第5

5、周開始上升至1∶126持續(xù)到第9周開始下降。最適合生產(chǎn)的卵黃抗體提取方法是生理鹽水法，保存方法可以-20℃凍存和凍干保存。
　　 將提取的卵黃抗體進(jìn)行了易感鴨被動治療試驗(yàn)，包括對卵黃抗體最小免疫效價(jià)、最佳注射途徑，以及對同居感染雛鴨的保護(hù)效果等。結(jié)果表明：我們制備的卵黃抗體對易感鴨的最低保護(hù)中和效價(jià)為27，可以使4日齡雛鴨免于死亡，并可以保護(hù)雛鴨渡過DVH易感期。最佳途徑是腿部肌肉注射。最佳治療時(shí)間為24h內(nèi)。此外，卵黃抗體對同