河北省鴨肝炎病毒BD-Ⅰ株的分離鑒定及弱毒株培育.pdf

1、鴨病毒性肝炎是由鴨肝炎病毒(DHV)引起雛鴨的一種傳染病，具有發(fā)病急、傳播迅速、病程短、病死率高等特點。本病在全國各地都有發(fā)生，是嚴重危害養(yǎng)鴨業(yè)的主要疾病之一，并常和其他病毒、細菌混合感染，嚴重影響了養(yǎng)鴨業(yè)，造成了巨大的經(jīng)濟損失。臨床上主要表現(xiàn)為食欲減退、神經(jīng)癥狀、突然死亡和肝臟腫大出血。病原有3種，其中Ⅰ型鴨肝炎病毒在世界范圍內(nèi)流行，Ⅱ型和Ⅲ型鴨肝炎病毒分別局限于英國和美國。不同血清型毒株具有不同的理化和生物學特性，且無免疫交叉反應。

2、近年來國內(nèi)外報道了Ⅰ型鴨肝炎病毒的變異株，且已完成了病毒基因組的測序工作，并隨之出現(xiàn)RT-PCR診斷技術(shù)，對雛鴨病毒性肝炎的診斷和防控具有重要意義。 本研究通過雞胚尿囊腔接種，對河北省保定地區(qū)采集的死于疑似鴨病毒性肝炎的病鴨肝組織進行病原分離，獲得1個病毒分離株，命名為BD-I株。該分離株經(jīng)病理學檢查、理化特性實驗、中和試驗、動物回歸試驗等鑒定為血清I型鴨肝炎病毒(DHV)。證實引起該鴨場雛鴨發(fā)病和死亡的主要原因為DVH所致。

3、 根據(jù)GenBank中已發(fā)表的I型鴨病毒性肝炎病毒(DHV-I)的基因序列，應用Primer Premier 5.0軟件設計了1對引物，建立了檢測DHV-Ⅰ的RT-PCR方法，該法能從DHV-I中擴增到506bp的條帶。經(jīng)敏感性、特異性檢測，證實為DHV-I的特異性條帶，而新城疫病毒(NDV)、傳染性法氏囊病病毒(IBDV)、鴨瘟病毒(DPV)、番鴨細小病毒(MPV)、鴨病毒性腫頭出血癥病毒(DSHDV)、鵝細小病毒(GPV)均為

4、陰性。最低檢測濃度到128倍稀釋的鴨肝毒(相當于500ELD50)。RT-PCR對河北保定地區(qū)的發(fā)病鴨群的13份鴨病毒性肝炎病料進行檢測，其檢出率為76.92％(10/13)。因此，所建立的RT-PCR檢測技術(shù)具有特異、快速和敏感的特點，可用于鴨病毒性肝炎病毒的快速診斷。 作者對實驗室分離的鴨肝炎病毒經(jīng)過雞胚傳代致弱后，收集雞胚尿囊液毒不同含毒量對1日齡雛鴨進行免疫，并于14日齡時用新型鴨肝炎強毒進行攻毒保護試驗，結(jié)果BD-I-