廣東省114株人腸道病毒分離株的分型鑒定研究.pdf

1、人腸道病毒(HEV)屬小RNA病毒科，是無(wú)菌性腦膜炎的主要病因，也可以引起其它急性感染性疾病，包括新生兒膿毒樣疾病、急性弛緩性麻痹(AFP)和急性出血性結(jié)膜炎等。鑒定腸道病毒常用中和法，但這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，有時(shí)需要使用乳鼠，標(biāo)準(zhǔn)抗血清的供應(yīng)也有限。為此我們建立了一套基于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和基因序列分析的鑒別腸道病毒的分子方法。首先測(cè)定腸道病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1部分序列，然后將測(cè)得的序列與GenBank中的68個(gè)原型株VPl序

2、列進(jìn)行比較分析，構(gòu)建種系發(fā)生樹(shù)，從而鑒別未知病毒型別。 本研究首先建立了分子定型的方法，然后選取廣東省消滅脊髓灰質(zhì)炎AFP監(jiān)測(cè)中從1994年至1998年分離的114株HEV為研究對(duì)象，對(duì)建立的方法進(jìn)行評(píng)估。采用傳統(tǒng)中和定型方法使用脊髓灰質(zhì)炎病毒1、2、3型標(biāo)準(zhǔn)血清和腸道病毒組合血清對(duì)1994年至1998年的腸道病毒分離株進(jìn)行中和鑒定。使用脊髓灰質(zhì)炎1、2、3型標(biāo)準(zhǔn)血清鑒定了114株病毒中的29株脊髓灰質(zhì)炎病毒，混合毒株也可以鑒別

3、定型；由于組合血清覆蓋的病毒型別范圍有限，114株各年分離的毒株中除29株脊髓灰質(zhì)炎病毒外，46株無(wú)法定型，占54﹪(46/85)。 采用基于腸道病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1基因部分序列種系發(fā)生分析方法對(duì)腸道病毒分離株進(jìn)行定型，114株病毒都成功擴(kuò)增，并完成了序列測(cè)定和分析，除2株無(wú)法定型外，其它毒株都能與某個(gè)原型株歸在同一組，從而確定毒株的型別；與中和定型結(jié)果相比兩者的符合率為85﹪(58/68)。闡明了使用RD(人橫紋肌肉瘤細(xì)胞)細(xì)胞