鴨肝炎病毒的分離鑒定及ELISA檢測抗原、抗體方法的建立.pdf

1、本實驗從一群發(fā)病鴨的病料中分離到一株鴨肝炎病毒，并建立了檢測鴨肝炎病毒抗原和血清抗體的ELISA快速檢測方法，取得了如下結(jié)果： 1．鴨病毒性肝炎病毒株的分離鑒定及部分理化特性的研究。 對湖北省內(nèi)某疑似鴨病毒性肝炎感染鴨病料的收集，通過細(xì)菌分離、病毒分離、中和試驗、動物回歸試驗、雛鴨保護(hù)試驗以及病毒的電鏡觀察，分離到一株鴨病毒性肝炎I型病毒株，對分離毒株的部分生物學(xué)特性進(jìn)行了初步研究。 2．鴨病毒性肝炎血清抗體EL

2、ISA快速檢測方法的建立和初步應(yīng)用。 將通過鴨胚傳代的病毒經(jīng)過純化后，作為包被抗原，建立了一種檢測血清中DHV抗體的間接ELISA方法。通過對ELISA反應(yīng)條件的系列測定，確定了各組分的最適工作條件：抗原包被濃度為3.75μg，血清稀釋約1:160時，陽性血清OD450值(P)接近1.0，陰性血清值(N)為0.125，P/N值最大。陰性和陽性分界明顯；通過對40份陰性鴨血清的檢測結(jié)果，確定陰陽性臨界點為0.2。根據(jù)建立的ELIS

3、A方法及最佳反應(yīng)條件，檢測了一批雛鴨攜帶母源抗體及其消長情況以及一批免疫雛鴨的抗體消長情況。結(jié)果表明，本試驗建立的間接-ELISA法可用于鴨血清中鴨肝炎病毒抗體水平的檢測以及未免疫鴨群鴨病毒性肝炎感染情況的檢測。 3．鴨病毒性肝炎病毒雙抗體夾心ELISA快速檢測方法的建立和初步應(yīng)用。 以純化的鴨抗DHV IgG為包被抗體，兔抗DHV IgG為第二抗體，通過ELJSA反應(yīng)條件的優(yōu)化選擇，建立了檢測DHV抗原的夾心ELISA

4、法。結(jié)果表明，鴨抗DHV IgG的最佳包被濃度為約2μg/ml，兔抗DHV IgG的最適工作濃度約為3.4μg/ml；與已知鴨病毒性肝炎標(biāo)準(zhǔn)病毒呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，與已知的陰性樣品及其它禽類病毒(NDV、IBV、DP、MDPV、IBDV、MDV)無交叉反應(yīng)；用建立的ELISA方法對97份疑為鴨肝炎的病料進(jìn)行了檢測，結(jié)果有73份呈陽性。經(jīng)過比較測定，夾心ELISA法要比瓊脂免疫擴(kuò)散方法要敏感64倍，說明本方法在檢測鴨病毒性肝炎病毒抗原方面具有特