鴨病毒性腸炎病毒gB基因主要抗原區(qū)域原核表達(dá)及其ELISA檢測(cè)方法的建立.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩56頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、鴨病毒性腸炎(Duck virus enteritis,DVE),俗稱鴨瘟(Duck plague,DP),是鴨、鵝、大雁等多種雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病,由鴨病毒性腸炎病毒(Duckenteritis virus,DEV)引起。病毒基因組編碼十幾種糖蛋白,其中g(shù)B蛋白是病毒囊膜表面展示的主要蛋白之一,也是主要的免疫原蛋白。本試驗(yàn)使用雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)鴨病毒性腸炎病毒,提純病毒后提取病毒DNA作模板。根據(jù)GenBank獲取

2、DEV基因序列(登錄號(hào)EF203709),利用生物學(xué)軟件DNAstar分析DEV gB蛋白氨基酸序列,篩選出其抗原性高、水溶性和表面展示概率高的2個(gè)區(qū)域(分別命名為gBa Asp113~Ala478: gBb Thr218~Val584),PCR擴(kuò)增出這兩段主要抗原區(qū)域并且克隆進(jìn)入載體pMD18-T Vector,目的基因經(jīng)PCR酶切鑒定后連接至原核表達(dá)載體pET-32a(+)。獲得的重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化E coliBL21(DE3)感受態(tài)

3、細(xì)胞,SDS-PAGE電泳分析顯示重組蛋白在IPTG誘導(dǎo)下以包涵體的形式高效表達(dá),Westem-blotting分析及重組蛋白免疫小鼠實(shí)驗(yàn)中血清抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果表明表達(dá)產(chǎn)物具有良好的抗原性,具有DEV診斷抗原及亞單位疫苗的應(yīng)用前景。 表達(dá)重組蛋白pET-32a-gBa經(jīng)過初步純化之后用作包被抗原,建立了針對(duì)DEV血清抗體的間接ELISA檢測(cè)方法。并且確定了最適抗原包被濃度為2.5μg/mL、最適血清稀釋度為1:800、血清

4、最適作用時(shí)間90min、最佳封閉條件為0.15%的BSA4℃封閉24h、酶標(biāo)抗體最適稀釋度為1:1000,最適作用時(shí)間為30min,底物最適顯色時(shí)間為37℃5min,判定標(biāo)準(zhǔn)為OD450≥0.446為陽(yáng)性。應(yīng)用該間接ELISA方法檢測(cè)了實(shí)驗(yàn)室保存的DEV陽(yáng)性血清。結(jié)果表明該診斷方法具有良好的特異性及敏感性,顯示了良好的應(yīng)用前景。 本研究成功克隆表達(dá)了DEV gB基因的主要抗原區(qū)域,獲得了可溶性表達(dá)的目的蛋白,為研究gB基因的功能

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論