鴨病毒性腸炎McAb-ELISA檢測方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、鴨病毒性腸炎(DuckViralEnteritisDVE)是鴨、鵝和其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病。用辛酸-飽和硫酸銨方法純化本室已制備的DEV單抗腹水，經(jīng)酶聯(lián)免疫印跡試驗鑒定此株單抗可以與69kD的DEV結(jié)構(gòu)蛋白特異性結(jié)合；非競爭ELISA方法測定其親和力常數(shù)為1.17×1011。 以此單抗為基礎(chǔ)，建立雙抗體夾心ELISA方法檢測DEV抗原。對反應(yīng)條件進行優(yōu)化，結(jié)果顯示：包被單抗、鴨抗DEVIgG和酶標(biāo)羊抗鴨二抗

2、分別稀釋4000倍、400倍和3000倍，加入的封閉液、被檢抗原、鴨抗DEVIgG、酶標(biāo)羊抗鴨二抗和底物溶液分別作用60min、60min、60min、90min和15min時試驗效果最好；經(jīng)交叉試驗、敏感試驗及重復(fù)性試驗驗證，該系統(tǒng)特異性強，敏感性較高，陰陽性樣品的變異系數(shù)(CV)均小于5％；與PCR試驗結(jié)果比較，該方法的敏感性為100％，特異性為85％，符合率為88％。通過對臨床樣品的檢測，確定心臟和脾臟是其最佳檢出器官。該方法的建

3、立與應(yīng)用對DEV的臨床檢測具有重要的實際意義。 以DEV作為包被抗原，利用待檢血清和本株單抗腹水純化物競爭這一抗原，建立競爭ELISA方法檢測DEV抗體。經(jīng)研究確定：DEV抗原包被濃度為7.5μg/ml,1％明膠封閉30min后，加入50倍稀釋待檢鴨血清與1000倍稀釋的純化單抗溶液的等量混合物，作用60min，酶標(biāo)羊抗鼠IgG的工作濃度為1：10000，作用60min，底物作用15min后終止反應(yīng)。研究表明，該方法特異性強，穩(wěn)