水貂細(xì)小病毒的分離鑒定及卵黃抗體的制備.pdf

1、水貂傳染性腸炎又名水貂病毒性腸炎,是由水貂腸炎病毒(MEV)引起的一種急性、高度接觸性、致死性傳染病。該病廣泛存在于世界各國(guó),是威脅水貂養(yǎng)殖的最大疾病之一,給養(yǎng)貂業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在我國(guó)水貂傳染性腸炎的預(yù)防主要是定期免疫接種,但近年來(lái)應(yīng)用疫苗免疫失敗的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生,有時(shí)呈地方性流行。發(fā)病水貂除采取對(duì)癥治療外,沒有有效的治療藥物,為此,我們開展水貂的流行病學(xué)研究工作,并在此基礎(chǔ)上,開展抗水貂病毒性腸炎抗體的研究工作。
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2、研究應(yīng)用貓腎F81細(xì)胞從疑似MEV感染的水貂病料中分離病毒,通過(guò)血凝試驗(yàn)、PCR等方法對(duì)分離得到的病毒進(jìn)行鑒定。同時(shí)對(duì)分離得到的病毒和大連送檢的水貂病料的VP2基因進(jìn)行了測(cè)序和遺傳進(jìn)化分析。在此基礎(chǔ)上,以分離得到的病毒為抗原,選擇種屬關(guān)系遠(yuǎn)的蛋雞作為免疫對(duì)象,制備卵黃抗體。利用氯仿和硫酸銨結(jié)合的方法提純卵黃抗體,應(yīng)用血凝抑制試驗(yàn)評(píng)定抗體的效價(jià)。結(jié)果利用F81細(xì)胞成功分離出一株病毒,命名為MEV-ZYL-1,鑒定結(jié)果表明這是一株水貂細(xì)小病

3、毒強(qiáng)毒株,具有良好的免疫原性。序列測(cè)定結(jié)果表明,MEV-ZYL-1與引起大連水貂腸炎的病毒同源性100％,VP2基因全長(zhǎng)1755個(gè)核苷酸,編碼584個(gè)氨基酸,與MEV標(biāo)準(zhǔn)毒株MEV-type2 VP2基因大小相同,已上傳Genebank,序列登錄號(hào)為GU272028、GU272029?；诩?xì)小病毒的系統(tǒng)發(fā)生表明,MEV-ZYL-1與2009年分離株Manzhouli、Suning親緣關(guān)系近,為目前國(guó)內(nèi)流行株。用MEV-ZYL-1為種毒制