豬細(xì)小病毒的分離鑒定及NS1-VP2基因遺傳進化分析.pdf

1、豬細(xì)小病毒(Porcine Parvovirus，PPV)是引起母豬繁殖障礙的主要病原之一，常常引起母豬不孕、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎等。除此之外，該病毒還可引起新生仔豬死亡及仔豬的皮炎和腹瀉等癥狀。PPV在世界范圍內(nèi)普遍存在和流行，可感染不同日齡豬群，其引起的疾病尤其是母豬繁殖障礙性疾病給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。本研究首先建立了臨床病料中PPV的PCR檢測方法，對臨床送檢的疑似PPV感染病料進行檢測，然后將檢測結(jié)果為陽性的病料開

2、展病毒分離，并對獲得的8株病毒分離毒株進行了生物學(xué)特性研究，在此基礎(chǔ)上對分離株NS1和VP2基因進行測序，了解并分析PPV基因變異特點及其遺傳演變規(guī)律。具體研究內(nèi)容如下：
　　 1.豬細(xì)小病毒PCR檢測方法的建立及應(yīng)用
　　 選取豬細(xì)小病毒NS1基因設(shè)計特異性引物，建立了豬細(xì)小病毒PCR檢測方法，試驗證明該方法具有良好的特異性和敏感性，可以檢測到最低含量為1.58pg的PPV基因組DNA。運用該方法對2010年6月份到2

3、011年9月份之間獸醫(yī)院收集的豬疑似PPV感染病料進行了檢測，在312份病料中檢出34份為陽性，檢出率為10.9%。
　　 2.8株豬細(xì)小病毒的分離鑒定及生物學(xué)特性分析
　　 將PCR檢測結(jié)果為陽性的病料開展病毒分離，共分離到8株P(guān)PV，在此基礎(chǔ)上進行了分離毒株生物學(xué)特性的研究。HA試驗結(jié)果表明8株病毒能在ST細(xì)胞中增值，血凝效價可達到28以上；PD50測定結(jié)果表明：PPV分離病毒JB，JZ，ZD，DS，ZM間的抗原性最

4、相近，GX，SX，HL與其它分離毒株間抗原性差異較大。
　　 3.8株P(guān)PV分離病毒NS1基因和VP2基因序列的測定與分析
　　 完成8株P(guān)PV NSI基因和VP2基因的克隆、測序。同源性比對分析發(fā)現(xiàn)不同分離毒株之間的NS1和VP2基因相似性均在98.0%以上，表明PPV NS1和VP2基因均具有較高的保守性；多重序列比對發(fā)現(xiàn)PPV NS1基因和VP2基因存在多處位點突變，對這些位點所受選擇壓力進行分析，發(fā)現(xiàn)VP2基因中

5、多個突變位點處于正向選擇壓力之下，可能對PPV適應(yīng)生存環(huán)境的改變及其自身的進化具有重要意義。
　　 4.PPV遺傳進化分析
　　 結(jié)合GenBank中收錄的PPV基因序列，構(gòu)建了NS1基因及VP2基因的系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果顯示：中國PPV分離株可分為四個亞群，本次試驗分離到的病毒SX，JZ，JB，ZD，GX均屬于亞群1，其中JB和ZD，SX和JZ進化關(guān)系較近，GX與其它4株病毒進化關(guān)系較遠；分離株DS和ZM屬于亞群2，二者進