豬細小病毒dna疫苗pcdna3.1vp2cpg的構(gòu)建

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬細小病毒DNA疫苗pCDNA3.1（+）-VP2-CpG的構(gòu)建姓名：田焱申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：曹三杰;文心田20080601C o n s t r u c t i o no f P P V D N A V a c c i n e p C D N A 3 ．1 ( + )- V P 2 - - C p G a n d E l e m e n t a r y A n a l y s e so

2、f I t sI m m u n o l o g i c a l A c t i v i t yT i a n Y a n ( P r e v e n t i v e V e t e r i n a r y M e d i c i n e )D i r e c t e db y ：C a oS a n j i eA b s t r a c tT h e d i s e a s eo f p o r c i n ep a r v o v

3、i r u s ( P P V ) i s c a u s e d b y p o r c i n e p a r v o v i r u s w h i c h i sam a j o r c a u s e o f r e p r o d u c t i o n f a i l u r e i ns w i n e ．P a r v o v i r u si n f e c t i o n s i np i g sm a y c a

4、 u s e f e t a ld e a t h a n d m u m m i f i c a t i o n ，s t i l l b i r t h sa n d o t h e r r e p r o d u c t i v e f a i l u r e si np r e g n a n t S O W S ，a n dd e r m a t i t i sa n dd i a r r h e a i np i g l e

5、 t s ．S i n c eP P V W a si s o l a t e db y C a r w n g h t i n19 6 7 ，t h ev i r u sa n di t ’S a n t i b o d yw e r e p r o v e d t ob ep o s i t i v e i nm a n y c o u n t r i e s ，a n dt h ea n t i b o d yp o s i t

6、i v e r a t eo fP P V r e a c h e s t o5 0 ％- 8 0 ％．I n c h i n a ，t h ea n t i b o d y p o s i t i v e r a t eo f P P V W a s u p t o8 0 ％，w h i c hc a u s e sl o t so f e c o n o m i c a ll o s s e s i ns w i n ep r o

7、d u c t i o n ．T h eb e s tm e t h o d t oc o n t r o lt h i sk i n d o fd i s e a s ei sp r e v e n t i o n ．A m o n g t h em e t h o d s ，d e v e l o p i n gv a c c i n ei sa k e y s t e p ．D N A v a c c i n e、析也i n c

8、o m p a r a b l ea d v a n t a g e i st h e m i r d g e n e r m i o n v a c c i n ew h i c h f o l o w s p m h o g e n y v a c c i n ea n d s u b u n i t v a c c i n e ．I nt h i ss t u d y , a p a i ro f p r i m e r sW a

9、 s d e s i g n e da c c o r d i n g t oS R 一1s t r a i no f P P V f r o mG e n B a n k a n d t h em a i na n t i g e n r e g i o no f V P 2 o f S R - 1 s t r a i n W a s a m p l i f i e db y P C R ．A n d t h es e q u e n

10、 c eW a s 114 6 b p ，w h i c h e n c o d e d 3 8 2 A A ．A n a l y s i so f t h e a n t i g e ne p i t o p e so f V P 2s h o w e d t h a tt h e r ea r es o m e a n t i g e ne p i t o p e s l o c a t e d i nt h e r e g i o

11、 n ．C o n c e r n e dt h i sw ec o n s t r u c t e da e u k a r y o t i ce x p r e s s i o n p l a s m i dp C D N A 3 ．1 ( + ) 一V P 2 u s i n g t h ee u k a r y o t i ce x p r e s s i o n v e c t o r o f p C D N A 3 ．1 (

12、 + ) ，a n d a tt h es a m e t i m e ，as y n t h e t i c o l i g o d e o x y n u c l e o t i d e( C p G —O D N ) c o n m i n i n g C p G - I S S W a s c l o n e d i n t ot h ee u k a r y o t i ce x p r e s s i o n p l a s

13、 m i dp C D N A 3 ．1 ( + ) - V P 2 t oc o n s t r u c ta n o t h e r e u k a r y o t i ce x p r e s s i o n p l a s m i d p C D N A 3 ．1 ( + ) - V P 2——C p G ．T h e nt h er e c o m b i n a n t e x p r e s s i o n v e c t

14、 o r sw e r e t r a n s f e c t e d i n t oC O S ．7c e l l sr e s p e c t i v e l y a n d m a d e t h e m e x p r e s si nv i t r o ．T h e r e s u l t s s h o w e d t h a tt h et w op l a s m i d a l s oC a n e x p r e s