豬2型圓環(huán)病毒病-豬細(xì)小病毒病-豬乙型腦炎三聯(lián)滅活疫苗的研制及對豬的免疫效力試驗.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)主要引起豬多系統(tǒng)功能衰竭性疾病(PMWS)，豬感染該病毒后產(chǎn)生免疫抑制，增加了對多種病原體的易感性。豬細(xì)小病毒(PPV)和豬流行性乙型腦炎腦病毒(JEV)均可以引發(fā)母豬的繁殖障礙及公豬的種用性能下降等疾病。PCV2與PPV、JEV，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了極大的經(jīng)濟(jì)損失，因此種豬均需要免疫接種這三種疫苗。但是目前國內(nèi)外市場上還沒有上述疾病的三聯(lián)疫苗，給豬病免疫接種帶來極大不便。為了有效地防控這三種疾病，簡化免疫程序、減少

2、免疫應(yīng)激、達(dá)到一針預(yù)防多病的目的，本研究利用實驗室自行分離鑒定的XXX株P(guān)CV2、XXX株P(guān)PV和XXX株JEV，研制出豬2型圓環(huán)病毒病-豬細(xì)小病毒病-豬乙型腦炎三聯(lián)滅活疫苗。具體研究內(nèi)容如下:
　　1、三聯(lián)滅活疫苗的制備
　　通過在PK-15細(xì)胞和BHK-21細(xì)胞分別上傳代增殖，獲得熒光定量拷貝數(shù)為XXX的PCV2病毒液，HA毒價為XXX的PPV病毒液和TCID50為XXX的JEV病毒液。對病毒液XXX倍透析濃縮、純化，等

3、體積混合制備疫苗的水相，加入XXX倍體積油相進(jìn)行乳化，制備了PCV2-PPV-JEV三聯(lián)滅活疫苗;對濃縮的上述三種病毒液XXX倍稀釋，兩兩等體積混合，使用同樣方法分別制備3種二聯(lián)滅活疫苗;對濃縮的病毒液XXX倍稀釋，制備3種滅活單苗。上述三種病毒在等體積的各種滅活疫苗中同種抗原的含量相同，為單苗、二聯(lián)和三聯(lián)滅活疫苗的不同免疫劑量和免疫效果比較奠定基礎(chǔ)。
　　2、滅活疫苗的檢驗
　　按照國家獸藥典對滅活疫苗做物理性狀及無菌檢驗

4、結(jié)果均符合要求。將滅活疫苗分別對KM小鼠、豚鼠、仔豬、后備母豬和妊娠母豬做了安全性試驗。結(jié)果表明，受試動物精神、食欲正常，注射部位沒有局部不良反應(yīng)，妊娠母豬分娩率為100％，平均產(chǎn)仔11.4頭，新生仔豬中弱仔比例為1.2％，無死胎、木乃伊胎。滅活疫苗對實驗動物和本動物安全性良好，對妊娠母豬的繁殖性能和新生仔豬健康狀況均無影響，表明本研究滅活疫苗安全可靠。
　　3、滅活疫苗對35日齡仔豬的免疫效力檢驗
　　本研究中二聯(lián)、三聯(lián)滅

5、活疫苗與的相應(yīng)自制滅活單苗及對照商品單苗的免疫效力比較顯示，多聯(lián)滅活疫苗的不同劑量組免疫效果均高于商品滅活/弱毒疫苗及生理鹽水對照組，且在低劑量（1 mL/頭）免疫時即可產(chǎn)生較高水平的抗體，同等免疫劑量時，的二聯(lián)和三聯(lián)滅活疫苗誘導(dǎo)的抗體水平高于各的滅活疫苗，甚至個別聯(lián)苗的低劑量免疫組產(chǎn)生的抗體水平也稍高于的滅活疫苗。7種滅活疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體均能維持10周以上。
　　本研究為豬圓環(huán)病毒病、豬細(xì)小病毒病和豬乙型腦炎病的聯(lián)合免疫提供了