豬圓環(huán)病毒2型全病毒及其Cap蛋白重組腺病毒滅活疫苗研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus 2)是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原，該病主要表現(xiàn)為體重下降，呼吸困難，黃疸以及間質(zhì)性肺炎，淋巴結(jié)腫大，肝炎和腎炎等癥狀。PMWS主要感染斷奶仔豬和育肥豬，自1991年在加拿大發(fā)生后，迅速蔓延到各養(yǎng)豬國家，成為目前危營世界養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一。 本研究將豬圓環(huán)病毒2型(P

2、CV2)用0.2％的甲醛37℃作用一定時(shí)間后接種PK-15細(xì)胞，盲傳3代，用PCR方法檢測滅活效果。將滅活的PCV2加入適量的白油和氫氧化鋁膠制成PCV2油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗后免疫小鼠，共免疫2次，時(shí)間間隔3周，分別于一免后21天和35天進(jìn)行ELIsA抗體檢測。同時(shí)為了評價(jià)國產(chǎn)油佐劑和進(jìn)口油佐劑的免疫效果，我們進(jìn)行了豬體免疫效力試驗(yàn)。通過ELISA抗體、攻毒后臨床表現(xiàn)及體溫變化、剖解時(shí)的病理變化、平均日增重及病毒血癥等指標(biāo)對疫苗效果

3、進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果為：①PCV2能被0.2％甲醛完全滅活，時(shí)間為16 h。②PCV2油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗免疫小鼠后均能產(chǎn)生較好的免疫應(yīng)答，并且油佐劑滅活疫苗免疫效果好于鋁膠佐劑滅活疫苗。③豬體免疫效力試驗(yàn)表明，兩油苗均產(chǎn)生較高水平的ELISA抗體。攻毒后，攻毒對照豬平均體溫高于免疫豬，空白對照豬在整個(gè)攻毒期中體溫始終保持正常。攻毒后免疫豬及空白對照豬平均體重均升高，而攻毒對照豬平均體重有所降低，且兩免疫組和空白對照組之間平均日增重差異顯

4、著(P<0.05)。病毒血癥檢測表明，攻毒21天后未在免疫豬血清中檢測到PCV2，而在兩頭攻毒對照豬血清中都檢測到了PCV2。用PCR方法檢測PCV2在肺臟、脾臟和淋巴結(jié)中的分布表明，攻毒后40天，攻毒對照豬在肺臟、脾臟和淋巴結(jié)中都檢測到了病毒，而免疫組8頭豬中僅在1頭豬的脾臟中檢測到病毒。 此外，本研究還將PCV2-Cap蛋白重組腺病毒(rAd-Cap)用0.2％的甲醛37℃作用一定時(shí)間后接種293細(xì)胞，盲傳3代，檢測滅活效果

5、。將rAd-Cap滅活后，加入適量的白油和氫氧化鋁膠制成Cap蛋白重組腺病毒油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗，免疫小鼠，3周后加強(qiáng)免疫一次，然后在一免后21天和35天進(jìn)行ELISA抗體檢測。為了進(jìn)一步評價(jià)國產(chǎn)油佐劑和進(jìn)口油佐劑的免疫效果，我們進(jìn)行了豬體免疫效力試驗(yàn)。通過ELISA抗體、攻毒后臨床表現(xiàn)及體溫變化、剖解時(shí)的病理變化、平均日增重及病毒血癥等指標(biāo)對疫苗效果進(jìn)行評價(jià)。 結(jié)果為： ①rAd-Cap能被甲醛完全滅活，時(shí)間為14

6、 h。 ②rAd-Cap油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗免疫小鼠后均能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，并且油佐劑滅活疫苗免疫效果好于鋁膠佐劑滅活疫苗。 ③豬體免疫效力試驗(yàn)表明，兩油苗均能誘導(dǎo)豬體產(chǎn)生較高水平的ELISA抗體。攻毒后，攻毒對照豬平均體溫高于免疫豬，空白對照豬體溫始終保持正常。攻毒后免疫豬及空白對照豬平均體重均升高，而攻毒對照豬平均體重有所降低，但兩免疫組和空白對照組之間平均日增重差異不顯著(p＞0.05)。病毒血癥檢測表