豬圓環(huán)病毒2型全病毒及其Cap蛋白重組腺病毒滅活疫苗研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus 2)是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)的主要病原，該病主要表現(xiàn)為體重下降，呼吸困難，黃疸以及間質性肺炎，淋巴結腫大，肝炎和腎炎等癥狀。PMWS主要感染斷奶仔豬和育肥豬，自1991年在加拿大發(fā)生后，迅速蔓延到各養(yǎng)豬國家，成為目前危營世界養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一。 本研究將豬圓環(huán)病毒2型(P

2、CV2)用0.2％的甲醛37℃作用一定時間后接種PK-15細胞，盲傳3代，用PCR方法檢測滅活效果。將滅活的PCV2加入適量的白油和氫氧化鋁膠制成PCV2油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗后免疫小鼠，共免疫2次，時間間隔3周，分別于一免后21天和35天進行ELIsA抗體檢測。同時為了評價國產油佐劑和進口油佐劑的免疫效果，我們進行了豬體免疫效力試驗。通過ELISA抗體、攻毒后臨床表現(xiàn)及體溫變化、剖解時的病理變化、平均日增重及病毒血癥等指標對疫苗效果

3、進行評價。結果為：①PCV2能被0.2％甲醛完全滅活，時間為16 h。②PCV2油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗免疫小鼠后均能產生較好的免疫應答，并且油佐劑滅活疫苗免疫效果好于鋁膠佐劑滅活疫苗。③豬體免疫效力試驗表明，兩油苗均產生較高水平的ELISA抗體。攻毒后，攻毒對照豬平均體溫高于免疫豬，空白對照豬在整個攻毒期中體溫始終保持正常。攻毒后免疫豬及空白對照豬平均體重均升高，而攻毒對照豬平均體重有所降低，且兩免疫組和空白對照組之間平均日增重差異顯

4、著(P<0.05)。病毒血癥檢測表明，攻毒21天后未在免疫豬血清中檢測到PCV2，而在兩頭攻毒對照豬血清中都檢測到了PCV2。用PCR方法檢測PCV2在肺臟、脾臟和淋巴結中的分布表明，攻毒后40天，攻毒對照豬在肺臟、脾臟和淋巴結中都檢測到了病毒，而免疫組8頭豬中僅在1頭豬的脾臟中檢測到病毒。 此外，本研究還將PCV2-Cap蛋白重組腺病毒(rAd-Cap)用0.2％的甲醛37℃作用一定時間后接種293細胞，盲傳3代，檢測滅活效果

5、。將rAd-Cap滅活后，加入適量的白油和氫氧化鋁膠制成Cap蛋白重組腺病毒油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗，免疫小鼠，3周后加強免疫一次，然后在一免后21天和35天進行ELISA抗體檢測。為了進一步評價國產油佐劑和進口油佐劑的免疫效果，我們進行了豬體免疫效力試驗。通過ELISA抗體、攻毒后臨床表現(xiàn)及體溫變化、剖解時的病理變化、平均日增重及病毒血癥等指標對疫苗效果進行評價。 結果為： ①rAd-Cap能被甲醛完全滅活，時間為14

6、 h。 ②rAd-Cap油佐劑和鋁膠佐劑滅活疫苗免疫小鼠后均能誘導機體產生體液免疫應答，并且油佐劑滅活疫苗免疫效果好于鋁膠佐劑滅活疫苗。 ③豬體免疫效力試驗表明，兩油苗均能誘導豬體產生較高水平的ELISA抗體。攻毒后，攻毒對照豬平均體溫高于免疫豬，空白對照豬體溫始終保持正常。攻毒后免疫豬及空白對照豬平均體重均升高，而攻毒對照豬平均體重有所降低，但兩免疫組和空白對照組之間平均日增重差異不顯著(p＞0.05)。病毒血癥檢測表