豬圓環(huán)病毒2型油乳劑滅活疫苗及其免疫效力研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)是造成斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的主要病原，目前已呈全球分布。疫苗免疫是預(yù)防PCV-2感染的主要措施之一。
　　 為預(yù)防與控制本地區(qū)PCV-2感染，本研究經(jīng)間接免疫熒光、抗原性試驗(yàn)，從PCV-2安徽分離株中篩選出一株疫苗候選毒株。疫苗株經(jīng)適應(yīng)細(xì)胞PK-15大量增殖，進(jìn)行滴度測(cè)定、甲醛滅活、超濾濃縮后，制備成油佐劑滅活疫苗。研究對(duì)滅活疫苗的免疫劑量、免疫程序進(jìn)行了優(yōu)化，并通過(guò)攻毒保護(hù)試驗(yàn)對(duì)疫苗的免疫效力進(jìn)

2、行評(píng)價(jià)。
　　 1、從4株P(guān)CV-2安徽分離毒株中篩選出一株病毒PCV2-BH0801株作為疫苗候選毒株，病毒滴度為10-4.59 TCID50/0.1mL。通過(guò)對(duì)PCV-2抗體陰性的斷奶仔豬進(jìn)行接種試驗(yàn)表明該毒株具有良好的抗原性。
　　 2、將PCV-2-BH0801株接種PK-15細(xì)胞進(jìn)行大量擴(kuò)增，獲得病毒滴度為10-4.55TCID50/0.1mL的病毒細(xì)胞培養(yǎng)物。0.1％甲醛37℃條件下30小時(shí)完全滅活后，利用中

3、空纖維超濾膜組件對(duì)病毒細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行超濾濃縮，使病毒滴度達(dá)到＞10-5.0TCID50/0.1mL。經(jīng)油佐劑高速乳化制備成油包水型滅活疫苗，物理性狀、無(wú)菌檢驗(yàn)和安全性檢驗(yàn)均合格。
　　 3、應(yīng)用1mL、2mL和4mL等不同免疫劑量的滅活疫苗免疫21日齡斷奶仔豬，免疫后對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能、PCV-2抗體水平進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用PCV2滅活疫苗2mL免疫劑量分別免疫14、21、28日齡仔豬，間隔14天和21天進(jìn)行加強(qiáng)免疫4mL，免疫后對(duì)仔豬的

4、生長(zhǎng)性能情況及PCV-2抗體水平進(jìn)行檢測(cè)以優(yōu)化免疫程序。結(jié)果顯示，仔豬28日齡首免2mL PCV-2滅活疫苗其抗體水平上升速度快，仔豬免疫應(yīng)激小，對(duì)生長(zhǎng)性能影響小，間隔21天加強(qiáng)免疫4mL PCV-2滅活疫苗后抗體水平能長(zhǎng)時(shí)間維持較高水平。
　　 4、通過(guò)免疫豬群的生長(zhǎng)性能監(jiān)測(cè)、抗體水平變化監(jiān)測(cè)、病毒血癥檢測(cè)、病理變化觀察及組織中PCV-2的檢測(cè)，對(duì)PCV-2滅活疫苗的免疫效力進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，免疫組攻毒后其生長(zhǎng)性能未受影響

5、，抗體水平始終顯著高于對(duì)照組，且均未出現(xiàn)病毒血癥，各組織臟器均未見(jiàn)有明顯的病理變化，也未能夠檢測(cè)到PCV-2；而對(duì)照組平均日增重則顯著低于免疫組，攻毒后7天即能檢測(cè)到病毒血癥，至21天依然能夠檢測(cè)到病毒血癥，仔豬肺臟、淋巴結(jié)、脾臟以及腎臟均有不同程度的病變，且在肺臟和淋巴結(jié)組織中檢測(cè)到PCV2。說(shuō)明本研究制備的PCV2滅活疫苗對(duì)仔豬有良好的保護(hù)作用。
　　 5、研究還對(duì)攻毒保護(hù)試驗(yàn)仔豬血清中Th1細(xì)胞分泌的IL-2、IFN-y以

6、及Th2細(xì)胞分泌的IL-4、IL-10等細(xì)胞因子進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，免疫組感染PCV2后Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子含量明顯高于Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，但感染后期Th1細(xì)胞因子有上升的趨勢(shì)，說(shuō)明免疫組仔豬感染后在體液免疫反應(yīng)保護(hù)下機(jī)體各項(xiàng)免疫反應(yīng)趨于正常；感染后期對(duì)照組仔豬各細(xì)胞因子含量均低于免疫仔豬。結(jié)果表明，本研究制備的PCV-2滅活疫苗能夠保護(hù)機(jī)體的免疫機(jī)制不會(huì)受到PCV2感染所致的免疫抑制。
　　 綜上所述，本研究制備的