豬細(xì)小病毒基因組序列分析與滅活疫苗的制備及免疫效果評(píng)價(jià).pdf

1、豬細(xì)小病毒病（Porcine parvovirusinfection，PPI）又稱豬的繁殖障礙病，是由豬細(xì)小病毒（Porcine parvovirus，PPV）引起的一種豬的繁殖障礙病。豬是唯一的易感動(dòng)物。PPV主要感染妊娠前期的母豬，引起母豬流產(chǎn)、胚胎死亡、胎兒畸形、木乃伊化、弱胎及不孕等危害，給養(yǎng)豬業(yè)造成了重大損失。因此，控制PPI對(duì)養(yǎng)豬業(yè)具有十分重要的意義。
　　本研究對(duì)經(jīng)PCR進(jìn)行擴(kuò)增的PPV核酸陽(yáng)性的病料進(jìn)行處理后，在豬

2、睪丸（Swine testicular cells，ST）細(xì)胞上進(jìn)行病毒分離，獲得1株P(guān)PV，命名為PPVGD。對(duì)獲得的PPVGD分離株進(jìn)行了病毒的耐脂溶劑、耐酸、耐熱及耐胰酶的理化特性鑒定，這些特性與PPV相符。
　　根據(jù)GenBank上已公布的PPV序列，設(shè)計(jì)合成引物，對(duì)PPVGD分離株基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增并進(jìn)行序列測(cè)定，獲得包含全部編碼區(qū)4251 bp的基因組序列。將PPVGD分離株與GenBank公布的44株P(guān)PV參考毒株

3、NS1基因和55株P(guān)PV參考毒株的VP2基因的核苷酸序列、氨基酸序列分別進(jìn)行比對(duì)分析，并繪制進(jìn)化樹。核苷酸序列相似性分析表明：PPVGD分離株的NS1基因的核苷酸序列與中國(guó)分離株HN-G、HN-H、HN-K的相似性最高，為99.9％，與33760005-3a株的相似性最低，為98.2%。PPVGD分離株的VP2基因的核苷酸序列與美國(guó)經(jīng)典株NADL-2和POVNADL-2的相似性最高，為99.7%，與15425株最低，為98.1%。氨基酸

4、序列相似性分析表明，PPVGD分離株的NS1基因的氨基酸序列與中國(guó)分離株HN-G、HN-K、J-PPV和NJ及美國(guó)毒株NADL-2、POVNADL-2和Kresse的相似性最高，為99.7%；與33760005-3a株的相似性最低，為98.0%。PPVGD分離株的VP2基因的氨基酸序列與中國(guó)分離株HN-I和美國(guó)毒株NADL-2和POVNADL-2的相似性最高，為99.0%；與WB-773和21620005-1h株的相似性最低，為96.4

5、%。
　　本研究將PPVGD分離株在ST細(xì)胞上增殖，并對(duì)病毒增殖條件進(jìn)行了優(yōu)化，獲得了大量的病毒液，為疫苗的制備奠定了基礎(chǔ)。培養(yǎng)的PPVGD病毒液的血凝效價(jià)可達(dá)1:29。利用獲得的病毒液，按照中國(guó)生物制品規(guī)程制備了PPV分離株的油乳劑滅活疫苗。
　　制備的PPVGD滅活疫苗分別免疫350 g左右健康豚鼠和4月齡左右的后備母豬。豚鼠免疫28 d后采血、后備母豬免疫14 d后、28 d后分別采血。后備母豬28 d時(shí)加強(qiáng)免疫一次，