豬細(xì)小病毒四型的初步研究.pdf

1、豬細(xì)小病毒4型(Porcine Parvovirus Type4,PPV4)屬于細(xì)小病毒科,細(xì)小病毒亞科,博卡病毒屬的新成員,于2009年由美國(guó)科學(xué)家Cheung等首次檢測(cè)發(fā)現(xiàn)并報(bào)道。此后兩年,許多科學(xué)家又檢測(cè)到其他型的博卡病毒,但相互間序列相似度很低。目前有關(guān)博卡病毒屬研究較多的是主要引起人的呼吸道和腸道疾病的人博卡病毒,而關(guān)于PPV4的研究還處于起步階段,目前僅局限于流行病學(xué)調(diào)查和病毒的近全序列測(cè)定分析,而與本研究相關(guān)的病毒分離,致

2、病性及組織嗜性等研究仍處于空白。本研究主要對(duì)PPV4這一新病毒的診斷方法、流行病學(xué)、感染性和功能蛋白表達(dá)等做了初步研究。
　　 首先,本研究對(duì)PPV4的分子流行病學(xué)進(jìn)行了較全面的調(diào)查:從2006年至2010年,共檢測(cè)了931份病料,檢出陽(yáng)性樣本131份,總陽(yáng)性率為14.07％。分析檢測(cè)結(jié)果顯示,2006-2008年期間,PPV4尚未在我國(guó)出現(xiàn)。從2009年開始,在中國(guó)部分豬群檢到PPV4,但檢出率極低,僅為3.52％。但從201

3、0年開始,PPV4的檢出陽(yáng)性率逐年升高,2010年的檢測(cè)率為27％,到2011年則高達(dá)31％。進(jìn)一步分析數(shù)據(jù)顯示,PPV4具有一定的區(qū)域性:檢出率最高的為天津、湖北和江蘇等省。冬季和春季是PPV4的高發(fā)季節(jié)(總46％)。同時(shí),數(shù)據(jù)顯示,PPV4在種豬身上的帶毒率較高(80％)。但是,非常奇怪的現(xiàn)象是,PPV4在健康豬中的陽(yáng)性率要高于發(fā)病豬(34.3％VS3.1％),并且,PPV4一般不與其他常見豬病共同出現(xiàn),檢出PPV4陽(yáng)性的豬都很少檢

4、出其他常見豬病病原。
　　 通過(guò)克隆并測(cè)定了7個(gè)PPV4的全基因組序列,分析顯示PPV4的基因組結(jié)構(gòu)和博卡病毒屬其他病毒相吻合,都存在3個(gè)開放閱讀框(ORFs),即ORF1(NS),ORF2(VP),ORF3(NP)。PPV4全長(zhǎng)與美國(guó)獲得的PPV4近全長(zhǎng)基本相一致,都是首尾連接的結(jié)構(gòu),但不同的毒株在連接部分存在不同的缺失。序列進(jìn)化分析顯示PPV4與博卡病毒屬的其他病毒以及與其他病毒的進(jìn)化距離都相當(dāng)遠(yuǎn)。
　　 PPV4動(dòng)

5、物攻毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PPV4在實(shí)驗(yàn)豬體內(nèi)存在明顯的消長(zhǎng)曲線,在接毒8天之時(shí)感染豬體內(nèi)的PPV4 DNA拷貝數(shù)達(dá)到高峰,隨后開始平緩的下降。組織嗜性分析顯示PPV4幾乎可以感染豬的所有器官,但在腸道以及泌尿道內(nèi)的含量要明顯高于其他器官。病理解剖結(jié)果也佐證了這一結(jié)果:感染豬的腸道腸系膜淋巴結(jié)明顯腫大。將感染后轉(zhuǎn)陽(yáng)的試驗(yàn)豬的血清過(guò)濾,超速離心富集后,進(jìn)行電鏡觀察,20000倍視野下可見類似細(xì)小病毒大小的病毒粒子。
　　 對(duì)PPV4的各個(gè)