豬細小病毒抗原快速檢測技術研究.pdf

1、豬細小病毒(Porcineparvovirus,PPV)是一種DNA病毒,隸屬于細小病毒科細小病毒屬,是豬場比較常見疾病,以引起豬的繁殖障礙為特征。該病可以豬群中長期隱性感染,并且感染率可以高達90％以上,對豬群造成嚴重危害。臨床上常用的血清學診斷方法因受豬細小病毒病長期帶毒和低劑量持續(xù)感染的限制,而使得檢測難度加大。同時實驗室診斷方法也受到設備、環(huán)境和時間的制約,無法得以推廣。本論文就針對以上弊端進行研制特異強、操作簡便的膠體金試紙快

2、速檢測試紙。
　　 在試驗進行中由于商品化抗豬IgG和兔IgG酶標抗體,均出現(xiàn)效價低,組化效果差。于是通過提取及凝膠柱純化豬IgG和兔IgG免疫山羊,經(jīng)過4次以上免疫,而后頸靜脈采血而得到AGP效價1:160-320的二抗血清。提取血清IgG利用SATP—SMCC法標記HPR,得到ELISA效價1:64000的酶標二抗用于實驗檢測。
　　 通過PK-15傳代細胞系在DMEM培養(yǎng)基中對豬細小病毒AV30-7909毒株的擴繁

3、,經(jīng)過5次傳代、擴繁增殖,出現(xiàn)明顯細胞病變。收集病毒通過濃縮、超速離心純化,免疫實驗兔,得到效價1:51200的多抗血清。
　　 利用純化的PPV細胞毒免疫BALB/c小鼠,經(jīng)過三次免疫獲得理想免疫效果。應用細胞融合技術篩選出特異性雜交瘤細胞株(7F487)。通過體內(nèi)誘導制備PPVmAb,提取、純化單抗IgG,而后通過膠體金標記研制出PPV抗原膠體金試紙,可以測定出1:640稀釋的組織毒。試紙檢測豬瘟、流行性乙型腦炎病毒和藍耳病