不同抗原型犬細小病毒及其與貓細小病毒分子鑒別方法的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、犬細小病毒(Canine parvovirus，CPV)和貓細小病毒(Feline parvovirus，F(xiàn)PV)是親緣關(guān)系密切的兩種細小病毒，都屬于細小病毒科，原細小病毒屬，肉食動物原細小病毒1型種的成員。犬細小病毒和貓細小病毒不僅能感染犬科、貓科、鼬科、浣熊科和靈貓科等多種動物，而且引起相似的臨床癥狀;是危害肉食動物健康最嚴重的烈性傳染病病原體之一;前者有多種抗原型且二者可混合感染動物，因此單憑臨床癥狀難以做出鑒別診斷，必須借助實驗

2、室檢測手段確診。
　　本研究經(jīng)大量CPV VP2基因序列比對，利用Beacon designer7軟件設(shè)計兩對引物和五條MGB探針。引物CPV-305F/CPV-305R和探針CPV-2-305P(CPV-2)/CPV-2a-305P(CPV-2a)用于區(qū)分CPV-2疫苗株和其它抗原型試驗;引物CPV-426F/CPV-426R和探針CPV-2-426P(CPV-2/2a)/CPV-2b-426P(CPV-2b)/CPV-2c-4

3、26P(CPV-2c)用于區(qū)分CPV-2a(2)、CPV-2b和CPV-2c抗原型試驗。通過這兩個單獨的多重TaqMan real-time PCR試驗可以有效的檢測和區(qū)分CPV-2、CPV-2a、CPV-2b和CPV-2c四種抗原型CPV。該檢測方法可檢測101個拷貝的CPV-2，CPV-2a和CPV-2b重組質(zhì)粒，102個拷貝的CPV-2c重組質(zhì)粒;特異性試驗表明本方法適合于CPV的檢測，而和犬瘟熱病毒、犬腺病毒和冠狀病毒等均無交叉

4、反應(yīng)性;本方法經(jīng)臨床初步應(yīng)用，并與PCR測序方法檢測結(jié)果進行對比，顯示兩者檢測結(jié)果符合率為100％。結(jié)果表明本研究成功建立了一種多重TaqMan real-time PCR檢測方法，該方法能夠用于檢測和區(qū)分CPV四個抗原型，并可定量測定CPV DNA。
　　本研究利用qPCR-HRM試驗分析可檢測單核苷酸多態(tài)性位點(SNP)和序列堿基組成變化的優(yōu)勢，依據(jù)FPV和CPV的SNP A4408C位點，設(shè)計一對引物，進化qPCR擴增;擴增

5、完成后的數(shù)據(jù)用Applied Biosystems(R)High Resolution Melt Software v3.1軟件自動分析;結(jié)果表明該方法能同時檢測感染動物糞便中的CPV或FPV DNA。特異性試驗表明本方法和犬瘟熱病毒，犬腺病毒和犬冠狀病毒等無交叉反應(yīng);敏感性試驗表明該方法最低可以檢測到42個拷貝的CPV和FPV的重組質(zhì)粒;為評估本方法的可行性，80個疑似細小病毒感染臨床樣品用于該方法和PCR-測序以及病毒分離等試驗的平