犬細(xì)小病毒的分離及其VP2蛋白真核表達(dá)與初步應(yīng)用.pdf

1、犬細(xì)小病毒（Canine parvovirus，CPV）屬于細(xì)小病毒科，細(xì)小病毒屬，該病毒最早發(fā)現(xiàn)于1970年代中期，被命名為CPV-2，主要導(dǎo)致犬嚴(yán)重的出血性胃腸炎或心肌炎。該病毒變異快，隨后幾年便分離到新型抗原變異株 CPV-2a、CPV-2b和CPV-2c，變異毒株逐漸取代CPV-2原始毒株并開始廣泛流行。犬細(xì)小病毒病是一種高度接觸性傳染病，發(fā)病率和死亡率高，病程短，是危害我國養(yǎng)犬業(yè)最為嚴(yán)重的傳染病之一。VP2蛋白是犬細(xì)小病毒衣殼

2、蛋白的主要成分，能在體外自我組裝形成類病毒樣顆粒，該蛋白包含了病毒的中和表位，具有較強(qiáng)的免疫原性，是疫苗研發(fā)的主要靶抗原。基于以上現(xiàn)狀本文主要進(jìn)行了以下三部分的研究：
　　一、犬細(xì)小病毒的分離
　　使用貓腎細(xì)胞（CRFK）對臨床采集的糞便樣品進(jìn)行病毒分離，根據(jù)PCR鑒定結(jié)果最終確定4株分離株均為CPV-2a亞型。選擇CPV-WH-6分離株進(jìn)行了空斑純化、毒價(jià)滴定、一步生長曲線分析、基因組序列測定等研究。全基因組的系統(tǒng)發(fā)育樹分

3、析表明，該分離株與 CPV-2a（序列號：KF676668.1）標(biāo)準(zhǔn)毒株有較高的相似性，同時(shí)VP2序列的系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明，該分離株與new CPV-2a亞型毒株距離最近。
　　二、犬細(xì)小病毒VP2蛋白的原核表達(dá)與真核表達(dá)
　　利用原核 E.coli表達(dá)系統(tǒng)，成功表達(dá)了 VP2蛋白。同時(shí)選擇昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了該蛋白在昆蟲細(xì)胞中的真核表達(dá)，表達(dá)量約為66μg/mL。
　　三、犬細(xì)小病毒疫苗的初步制備
　　制備