犬科和貓科動(dòng)物細(xì)小病毒分離株VP2基因的遺傳進(jìn)化分析研究.pdf

1、肉食獸細(xì)小病毒屬于細(xì)小病毒科、細(xì)小病毒屬中的一類病毒。由肉食獸細(xì)小病毒引起的疾病存在于世界各地。在我國(guó)，無(wú)論是家養(yǎng)動(dòng)物還是野生動(dòng)物均有細(xì)小病毒相關(guān)疫病的流行，其中貓泛白細(xì)胞減少癥病毒是危害我國(guó)貓科、浣熊科和鼬科等多種家養(yǎng)、圈養(yǎng)、野生和經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的主要傳染病病原體之一。犬細(xì)小病毒感染的動(dòng)物之多，其致病性之強(qiáng)，致死率之高，對(duì)我國(guó)軍犬、警犬、觀賞犬及家養(yǎng)犬的飼養(yǎng)造成了巨大的威脅。所以細(xì)小病毒的研究受到眾多學(xué)者的關(guān)注。該病毒VP2基因決定病毒的宿

2、主范圍、血凝性和抗原性。肉食獸細(xì)小病毒快速的演化速度與VP2蛋白上幾個(gè)關(guān)鍵氨基酸殘基的變異并迅速適應(yīng)宿主犬有關(guān)。 本研究根據(jù)Genbank登錄的貓泛白細(xì)胞減少癥病毒、犬細(xì)小病毒、水貂腸炎病毒VP2序列進(jìn)行比較，選擇其保守序列，設(shè)計(jì)一對(duì)檢測(cè)肉食獸細(xì)小病毒的特異性通用引物，從2007年-2008年之間我國(guó)不同地方送檢的疑似CPV感染的30份犬科動(dòng)物樣品中PCR檢測(cè)出18份CPV陽(yáng)性樣品；并從20份疑似FPV感染的貓科動(dòng)物病料樣品中檢

3、測(cè)出10份FPV陽(yáng)性樣品。用F81細(xì)胞從18份CPV陽(yáng)性樣品中分離鑒定到9株CPV，從10份FPV陽(yáng)性樣品中分離鑒定到7株FPV，經(jīng)形態(tài)學(xué)、理化學(xué)、生物學(xué)和分子病毒學(xué)等進(jìn)一步鑒定這16株病毒。通過(guò)設(shè)計(jì)肉食獸細(xì)小病毒VP2全長(zhǎng)特異性通用引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增了VP2全長(zhǎng)基因并進(jìn)行克隆和序列分析。用分離的CPV分離株對(duì)健康犬進(jìn)行人工感染實(shí)驗(yàn)，十天內(nèi)所感染犬均出現(xiàn)典型的犬細(xì)小病毒感染臨床癥狀，其中CPV-CN-5株感染犬以死亡告終。病毒檢測(cè)結(jié)果顯

4、示不同時(shí)間我國(guó)不同地方送檢病料細(xì)小病毒陽(yáng)性率比較高，推斷CPV和FPV在我國(guó)犬科和貓科動(dòng)物普遍存在。9株CPV病毒和7株FPV株病毒均能在F81細(xì)胞上生長(zhǎng)，產(chǎn)生典型的肉食獸細(xì)小病毒細(xì)胞病變。通過(guò)人工感染實(shí)驗(yàn)，篩選出一株強(qiáng)毒株，為CPV的預(yù)防提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。序列分析表明分離的16株病毒的VP2基因全長(zhǎng)均為1755bp，編碼584個(gè)氨基酸，與國(guó)外FPV標(biāo)準(zhǔn)毒株CU-4 VP2基因大小相同；所分離的7株FPV之間核苷酸同源性為99.93％；氨

5、基酸的同源性為99.8％，與Genbank所登錄的國(guó)內(nèi)外FPV的VP2基因序列比較，核苷酸同源性為99.62％，其氨基酸同源性為99.75％。對(duì)所分離的9株CPV病毒株進(jìn)行序列分析，發(fā)現(xiàn)CPV分離株之間的核苷酸同源性為99.41％，氨基酸同源性為99.05％，與國(guó)內(nèi)外CPV分離株VP2基因核苷酸同源性在99.40％-99.44％之間，氨基酸同源性在98.99％-99.14％之間。FPV VP2基因的系統(tǒng)發(fā)生分析表明，F(xiàn)PV分離株核苷酸大