北京地區(qū)犬細小病毒分離株的基因變異研究.pdf

1、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文北京地區(qū)犬細小病毒分離株的基因變異研究姓名：蘇建青申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：陳西釗;孫明20030401A b s t r a c tA b s t r a e t ：T h e e v o l u t i o na n dv a r i a t i o n o f c a n i n e p a r v o v i r u s ( C P V ) i s o l a t e d i n B e

2、 i j i n g a e r a w e r ee x a m i n e d ．T h e P C R w a s d e v e l o p e d o n t h e b a s i s o f t h e p u b l i s h e d s e q u e n c e s a n d s p e c i a l 。p o i n tv a r i a t i o n ．w h i c h c o u l d d i f

3、f e r e n t i a t e C P V 一2 ，C P V 一2 a a n d C P V 一2 b ．T y p c - s p e c i a l P C R w a s u s e d t od i f f e r e n t i a t eC P V ．2 f o r mC P V ．2 a a n d C P V ．2 b ，a n dP C R A m p l i f i c a t i o no f S p

4、e c i f i cA I I e l e s ( P A S A ) W a su s e dt o d i t i e r e n t i a t eC P V ．2 a f r o m C P V ．2 b ．Ai o t a I o f 3 1 C P V i s o l a t e s f r o mi Ud o g s c o l l e c t e df o r mB e r i n g a r e ao f C h i

5、 n a w e r et y p e d b y t y p e ·s p e c i a iP C R o rP A s A ．T h e p o i n tm u t a t i o ni nV P 2r e s i d u e2 9 7 o fc a n i n e p a r v o v i r u sf r o mS e r t oA l a a c i dW a s e x a m i n e d ，w h i

6、c h c a u s e s a a l t e r a t i o n o f t h e r e s t r i c t i o ne n z y m eA l u I s i t e ． M u t a t i o n a t r e s i d u e 2 9 7i n t h e V P 2s e q u e n c e o ft h eC P V i s o l a t e d s t r a i n sW a se x

7、a m i n e d b y t h e P C R - b a s e dr e s t r i c t i o n f r a g m e n t l e n g t hp o l y m o r p h i s m ．T h eV P 2c a p s i d p r o t e i n g e n e so fC P V - 0 1 0 ( C P V - 2 a ) a n d C P V 一2 1 ( C P V - 2

8、b ) s t r a i n s w e r ec l o n e d ，s e q u e n c e d , a n d t h e n a n a l y s e d w i t h r e s p e c t t o t h e i r e v o l u t i o n a r y r e l a t i o n s h i pt o o t h e rC P Vi s o l a t e s ．T h e p a r t

9、i a lg e n es e q u e n c e so f t h et w oC P V sw e r ec l o n e d a n ds e q u e n c e d i n o r d e rt oe x a m i n et h e i rd i f f e r e n c e sb e t w e e nt a n d e mr e p e a t si nt h e5 n o n - c o d i n gr e

10、 g i o n ，a n dc o m p a r e dh o m o l o g yw i t ht a n d e mr e p e a ts e q u e n c e s o f o t h e r sp a r v o v i r u s ．T h e r e s u l t so f t h eP e R t y p i n go fC P V i s o l a t e ss h o w e dC P V - 2 aa

11、 n d C P V - 2 b w e r eb o t hp r e s e n t i nB e i j i n ga r e a ．1 tW a s f o u n dt h a tC P V 一2 W a s n o td i s c o v e r e d i n i s o l a t e d s t r a i n s ．C P V - 2 ah a s l 8 i s o l a t e s ．a(chǎn) n dC P V -

12、 2 bh a s 1 3 i s o l a t e s ．C P V - 2 bw a sf i r s td i s c o v e r e di n 1 9 9 7 ’Si s o l a t e s ．a(chǎn) n dC P V 一2 b i s o l a t e sw e r eg r a d u a l l y i n c r e a s i n g s i n c e 1 9 9 7 ．T h e d i f f e r e

13、 n c e so f V P 2 r e s i d u e s 2 9 7 W a se x a m i n e d ，t h e r e s u l t si n d i c a t e dt h a tA l a w a st h e p r e d o m i n a n tV P 2r e s i d u e2 9 7o f C P V 一2 aa n d C P V - 2 bi s o l a t e s i nB e

14、r i n ga r e a ．T h e r e s u l t s o f c l o n i n ga n ds e q u e n c i n go f V 】P 2 g e n e s h o w e dt h es t r u c t u r a l p r o t e i nV P 2c o n t a i n sl 7 7 5n u c l e o t i d e s ，e n c o d i n g5 8 4a m i

15、 n oa c i d s ．T h e r e i s a h i g h h o m o l o g yi nn u c l e o t i d e s e q u e n c e a n da m i n o a c i ds e q u e n c e sw h i c h w e r e d r i v e df r o m t h e v i r u sV P 2 g e n o m e s o f C P V - 0 1

16、0 ．C P V ．2 1 ‘C P V 。I MC P V - 1 5 ，C P V - N ．n e r a t eo f n u c l e o f i d es e q u e n c eh o m o l o g y i s 9 9 ．3 8 ％～9 9 ．6 6 ％，a n d t h er a t eo f a m i n oa c i d h o m o l o g yi s 9 8 ．6 3 ％～9 9 ．8 3 ％．

17、1 1 1 e r e s u l t s o f a n a l y s i s o ft a n d e m r e p e a t s e q u e n c e s s h o w e dC P V - 0 1 0a n dC P V - 2 1 t o o k t h es a m et a n d e m r e p e a t sn o t o n l y i n n u m b e rb u ta l s o i n l

18、 o c a t i o n ．w i t hag e n o m eh o m o l o g y o f 9 9 ．3 3 ％．T h ea s s a ys h o w e dt h a tt h ee v o l u t i o na n d v a r i a t i o no fC P V i n B e r i n ga e r a f o l l o w e d t h e s a m ep a u e mo b s e

19、 r v e d i no v e r s e a s ．P h y l o g e n e t i c a n a l y s i so ft h e i r sc o m p l e t eV P 2 s e q u e n c e si n d i c a t e dt h e yo r i g i n e df r o ma c o m m o n a n c e s t o r ．K e y w o r d ：C a n i